島津蛋白測序儀專用試劑/色譜柱

來源：作者：人氣：-發表時間：2020-03-11 10:52:00【大中小】

島津公司的蛋白質測序儀（Protein Sequencer）PPSQ以Edman降解法為基礎，將蛋白質從N-末端順次切斷進行序列分析。此方法具有直接測定、可靠性高的優勢。PPSQ 51A/53A開發了單克隆抗體藥、重組蛋白藥的N-末端氨基酸序列分析方法，另外，也開發了具有特殊結構的生物藥N-末端氨基酸序列分析方法。

N-末端氨基酸序列分析是很多已上市生物藥的年檢項目，并在開發和質量控制方面起著至關重要的角色。高靈敏度、適用于基因克隆探針引物常規氨基酸序列測定的蛋白序列儀的市場占有量日益擴大，島津與Fujifilm-Wako聯合開發的儀器配套試劑/色譜柱可助力蛋白組學研究。

西寶生物作為Wako指定國內代理商,提供島津蛋白測序儀PPSQ配套用wako品牌試劑和耗材，進口品質，產品齊全，貨期穩定。

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埃德曼降解法

埃德曼降解法（Edman degradation method）是由菲爾•埃德曼（Pehr Edman）首先創立，用于肽鏈或蛋白質N-末端氨基酸序列分析的常用方法，其原理很簡單，在堿性條件下反應，用異硫氰酸苯酯（Phenyl isothiocyanate, PITC）與待檢測的蛋白質（多肽）的N-末端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后處理-關環-選擇性切斷肽鏈N-端，得到N-端氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接著用有機溶劑萃取衍生物，在酸的作用下，不穩定的生物轉變為穩定的的乙內苯酰硫脲（PTH）衍生物，余下肽鏈中的酰胺鍵不受影響。通過用HPLC或電泳法分析生成的乙內酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鑒定出氨基酸類別。重復氨基酸鑒定反應以達到對N端氨基酸按照從N端到C端的方向依次對氨基酸序列進行分析。對于序列較長的蛋白質（多肽），還可以將樣品先切成小的肽段，先對肽段序列分析，再將肽段信息進行拼接即可獲得完整蛋白質的序列信息。

背景

島津公司的蛋白質測序儀（Protein Sequencer）PPSQ以Edman降解法為基礎，將蛋白質從N-末端順次切斷進行序列分析。此方法具有直接測定、可靠性高的優勢。近期，島津推出新型的蛋白質測序儀PPSQ 51A/53，配備SPD-M30A高靈敏度檢測器、軟件滿足FDA 21 CFR Part 11數據完整性的要求。PPSQ 51A/53梯度系統更是在等度系統基礎上，提高檢測靈敏度，適合微量樣品的氨基酸序列分析。應用島津PPSQ 51A/53A開發了單克隆抗體藥、重組蛋白藥的N-末端氨基酸序列分析方法，另外，也開發了具有特殊結構的生物藥N-末端氨基酸序列分析方法，如甲硫氨酸缺失、焦谷氨酸環化封閉等樣品。

目前，在制藥領域，生物藥得到越來越多的關注。生物藥是利用DNA重組、細胞融合、細胞培養等生物技術開發出的蛋白質藥物、抗體藥物等。幾乎所有蛋白質合成都起始于N-末端，其序列組成對于蛋白質整體的生物學功能有著重要的影響力，因此蛋白質的序列分析對于生物藥效果很關鍵。不僅在研發中，而且在質量控制中都很重要。

2015版《中國藥典》三部人用重組DNA技術產品總論對生物藥的生產及質量控制方面，，針對其蛋白質結構提出技術要求，應測定目標產品的氨基酸序列，并與其基因序列推斷的理論氨基酸序列進行比較。因此，N-末端氨基酸序列分析是很多已上市生物藥的年檢項目，如重組人促紅素注射液（CHO細胞）、重組人粒細胞刺激因子注射液等。此外，國際法規中也有對于生物藥N-末端氨基酸序列測定的要求。藥品注冊的國際協調組織頒布的指導法規ICH-Q6B規定，生物藥進行申報時，必須提供N-末端氨基酸序列信息。《歐洲藥典》中規定，生物仿制藥申報也必須提供N-末端序列信息。

PTH氨基酸的梯度分離案列

在PPSQ系統（Edman降解法）分析柱中加入50ul的樣本溶液，為了進行梯度洗脫而不改變該點，使用了一個半微柱。流動相A為乙酸鹽緩沖液、乙腈，流動相B為乙酸鹽緩沖液、甲醇、2-丙醇。

圖4（a）表示通過梯度洗脫2pmol的PTH-氨基酸標準混合物而獲得的色譜圖

圖4（b）表示通過等度洗脫而獲得的色譜圖。

盡管PTH氨基酸的洗脫順序略有不同，但檢測到通過梯度洗脫獲得的PTH氨基酸的峰高比等度洗脫高約3至5倍。

蛋白質測序儀比較一個循環和上一個循環之間PTH氨基酸峰的增加和減少，并鑒定出特異性檢測的PTH氨基酸。

圖1 PTH-氨基酸標準混合物（2 pmol）的分析
（A）梯度系統，（b）等度系統

在等度洗脫中，由于流動相的組成恒定，因此洗脫時間較晚的疏水性氨基酸的峰高較低。另一方面，梯度洗脫可改善高疏水性PTH氨基酸的分離，因為具有高洗脫能力的流動相B的濃度會隨時間增加（圖1a）。

梯度洗脫還可以分離和檢測500 fmol的PTH氨基酸（圖2），即使使用蛋白質測序儀分析小樣品，也可以輕松檢測特異增加的PTH氨基酸。

圖2 分析PTH-氨基酸標準混合物（500 fmol）

Wako品牌蛋白測序儀配套用試劑/色譜柱

蛋白內切酶

產品編號	產品名稱	中文名稱	包裝	用途
125-05061	Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade	賴氨酰肽鏈內切酶，質譜等級	20 ug×5	用于蛋白質研究
202-15951	Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry Grade	胰蛋白酶，從豬胰臟中，質譜等級	20 μg×5	用于蛋白質研究
050-05941	Endoproteinase Glu-C, Sequencing Grade	測序級谷氨酰蛋白內切酶Glu-C	50ug	用于蛋白質研究
056-05921	Endoproteinase Asp-N, Sequencing Grade	測序級天冬氨酰蛋白內切酶Asp-N	2ug	用于蛋白質研究

色譜柱

產品編號	產品名稱	中文名稱	包裝	用途
235-63951	WakopakWakosil-PTH-II 4.6×250mm(S-PSQ)	氨基酸硅膠柱PTH-II色譜柱	1 Column	專用柱

試劑耗材

產品編號	產品名稱	中文名稱	包裝	用途
200-20021	12% Trimethylamine Solution	12%三甲胺溶液【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
207-10761
207-20031	Trifluoroacetic Acid	三氟乙酸【危】	40 mL	用于島津蛋白肽測序
204-10771
018-26041	37% Acetonitrile Solution	37%的乙腈溶液【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
014-13831
033-24371	1-Chlorobutane	1-氯丁烷【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
021-09851
052-09041	Ethyl Acetate	乙酸乙酯【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
054-04981
084-05501	Heptane	庚烷【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
014-12471	Acetonitrile	乙腈【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
165-27361	PTH-amino Acids Mixture Standard	PTH-氨基酸混合標準品【危】	2 mL用×4	用于島津蛋白肽測序
163-12271
168-27351	PTH-amino Acids Mobile Phase	PTH-氨基酸流動相【危】	1 L	用于島津蛋白肽測序
161-14271
161-27341	5% Phenyl Isothiocyanate, n-Heptane Solution	5%異硫氰酸苯酯，正庚烷溶液【危】	40 mL	用于島津蛋白肽測序
168-14161
204-20041	25% Trifluoroacetic Acid Solution	25%三氟乙酸溶液【危】	40 mL	用于島津蛋白肽測序
203-12201
072-06461	Glass Fiber Disk, TFA Treated	玻璃纖維盤，TFA處理	50 Plates	用于島津蛋白肽測序
073-04171
132-18821	30%N-Methylpiperidine Solution(for Gradient Elution)	30% N-甲基哌啶溶液（用于梯度洗脫）【危】	200 mL	用于島津蛋白肽測序
202-20721	25% Trifluoroacetic Acid Solution (for Gradient Elution)	25% 三氟乙酸溶液（用于梯度洗脫）【危】	40 mL	用于島津蛋白肽測序
236-63981	Wakopak^® Wakosil PTH-GR (S-PSQ)(for Gradient Elution)	Wakopak^®Wakosil PTH-GR (S-PSQ)（用于梯度洗脫）	1 EA	用于島津蛋白肽測序
163-28261	PTH-amino Acids Mobile Phase A (for Gradient Elution)	PTH-氨基酸流動相 A（用于梯度洗脫）【危】	1 L	用于島津蛋白肽測序
160-28271	PTH-amino Acids Mobile Phase B (for Gradient Elution)	PTH-氨基酸流動相 B（用于梯度洗脫）【危】	1 L	用于島津蛋白肽測序

染色

產品編號	產品名稱	中文名稱	包裝	用途
293-57701	Negative Gel Stain MS Kit	負凝膠染色MS試劑盒	20 tests	用于電泳
299-58901	Silver Stain MS Kit	銀染劑MS試劑盒	20 tests	用于電泳