腫瘤標志物聯合檢測法應用指南
腫瘤標志物聯合檢測法在早期發現、病程監控、機制研究、腫瘤轉移及預后監測中應用
世界衛生組織作出最新權威性結論,癌癥患者如能早期發現,治愈率可達80%以上。腫瘤標志物可以比影像學更早的發現腫瘤,因而對于治療癌癥意義深遠。腫瘤標志物的分泌來源于腫瘤微環境的基質細胞以及腫瘤細胞,存在于細胞、組織或體液中,能用化學或免疫方法定量證實腫瘤存在,監測腫瘤治療和預后的物質。

圖1:常見腫瘤標志物聯合檢測方案
目前為止,還沒有找到靈敏度、特異性100%的腫瘤標志物。單一指標、單一因子的檢測很難準確的實現腫瘤早期檢測、病程監控及預后治療效果的評估等。如傳統的Elisa方法,僅能進行單一蛋白因子的檢測。若要提高檢測的準確性和特異性,需要進行多個Elisa實驗檢測不同的蛋白因子。以10個蛋白因子檢測為例,需要10個Elisa試劑盒,至少1ml的樣本,一周時間才能得到結果。無論從人力、財力還是時間和樣本量來說,都不是很好的選擇。而且10個因子不是同時檢測也可能造成結果的誤差。

圖2 檢測對象越豐富疾病區分度越好(class代表指標分類,marker代表具體指標)
目前,實現腫瘤標志物聯合檢測的最便捷最高效的技術手段之一就是xMAP技術。xMAP技術基于不同熒光編碼的微珠。每一種編碼微珠標記一種可捕獲相應目標分子的抗體,根據檢測靶標的數量,選擇1-100種標記的微珠,混合后與樣品中待測的靶標分子作用,然后在液流驅動下逐個通過檢測窗口,兩束不同波長激光對每個微球進行檢測,635nm激光檢測微球的色標編碼從而確定檢測的靶標,532nm激光檢測相應靶標上的熒光標記進行定量,通過計算機分析和標準曲線擬合,直接對每一種目標分子進行定量。該技術利用Luminex多功能液相芯片平臺實現了對蛋白、核酸等靶標分子的多重檢測,是唯一被納入美國臨床實驗室質控的高通量技術,被譽為真正的臨床型生物芯片。

圖3 xMAP技術原理圖
基于xMAP技術的多重檢測平臺的優勢:
- 多重檢測:實現1-500重因子同時檢測,為微量樣本的精確檢測提供技術保障;
- 高靈敏度:精密的光學設計提升檢測靈敏度,可低至0.04pg/ml;
- 快速/高通量:96/384孔板自動化高通量檢測,每小時數據量可達9,600個結果;
- 微量樣本:僅需10-50ul的樣本量使得跟蹤動物模型的階段性變化成為可能,避免個體差異帶來的實驗誤差。
目前,已有幾千篇文獻報道利用xMAP技術進行腫瘤標志物聯合檢測以提高腫瘤檢查準確性和特異性。例如,Irene等人采用非侵入性方法(血清)對卵巢癌6個標志物進行檢測,發現6個標志物聯合診斷比原來的單個CA-125檢測準確率明顯提升(95.3% vs 72%),從而能夠展開卵巢癌的早期治療(圖2)。

圖4:Irene等人卵巢癌早期檢測研究已發表于Clinic Cancer Research(IF: 8.19)
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此文關鍵字:腫瘤標志物
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