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SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺預制膠

包裝:5塊
  • 英文名:SuperSep Phos-tag
  • 別名:丙烯酰胺預制膠
  • 品牌:Wako
SuperSep Phos-tag?丙烯酰胺預制膠,內含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預制膠中含有鋅作為金屬離子,無需特異性磷酸化抗體或者同位素標記,在中性凝膠緩沖液中保存穩定性很好,結果條帶清晰。預制膠打開包裝即可直接使用。根據實驗條件,Phos-tag預制膠有多款丙烯酰胺濃度和孔數可選,提供專門適合BioRad和Life Technologies電泳槽尺寸的預制膠。

*西寶提示:我司所銷售的化學試劑、原料等所有產品(包括但不限于抗生素類、蛋白質類、試劑盒類產品等)僅限用于科學研究用途,不得作用于人體。

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SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠
SuperSep Phos-tag即丙烯酰胺預制膠
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠,內含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預制膠中含有鋅作為金屬離子,無需特異性磷酸化抗體或者同位素標記,在中性凝膠緩沖液中保存穩定性很好,結果條帶清晰。預制膠打開包裝即可直接使用。根據實驗條件,Phos-tag預制膠有多款丙烯酰胺濃度和孔數可選,提供專門適合BioRad和Life Technologies電泳槽尺寸的預制膠。
Phos-tag磷酸化親和電泳原理
Phos-tag<sup>™</sup>磷酸化親和電泳原理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠產品特點:
■ 即開即用 - 節約寶貴的時間
■ 根據磷酸化程度分離磷酸化蛋白
■ 分離效果好,條帶清晰
■ 無需磷酸化特異性抗體和放射性同位素標記
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠案例:
(1)分離磷酸化和去磷酸蛋白
分離磷酸化和脫磷酸蛋白
[電泳緩沖液]
Tris-甘氨酸-SDS 緩沖液

[電泳樣品]
條帶1: 未處理白蛋白
條帶2: 去磷酸化白蛋白

[電泳條件] 20 mA, 70分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水

白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化,采用的是堿性磷酸酶(日本基因公司,貨號319-02661)。條帶遷移證明去磷酸化完成。
(2)去磷酸化過程
去磷酸化過程
[電泳緩沖液]
Tris-甘氨酸-SDS 緩沖液

[電泳樣品]
條帶1: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 0 分鐘)
條帶2: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 15 分鐘)
條帶3: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 30 分鐘)
條帶4: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 45 分鐘)
條帶5: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 60 分鐘)

[電泳條件] 35 mA, 60分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水

β-酪蛋白按時間序列進行去磷酸化。結果證明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分離開了。同時驗證去磷酸化程度與時間相關。
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠產品列表
1、適用于Bio-Rad電泳槽的預制膠
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
198-17981
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
195-17991
5 gels
2、適用于Life-technology電泳槽的預制膠
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
192-18001
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
199-18011
5 gels
3、適用于wako電泳槽的預制膠(>90 x 85 x 1 mm)
Product Name Well Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%
13 wells
192-17401
5 gels
17 wells
199-17391
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%
13 wells
195-17371
5 gels
17 wells
192-17381
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%
13 wells
193-16711
5 gels
17 wells
190-16721
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%
13 wells
195-16391
5 gels
17 wells
193-16571
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%
13 wells
193-16691
5 gels
17 wells
196-16701
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%
13 wells
197-16851
5 gels
17 wells
194-16861
5 gels
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠使用須知
樣品制備:
Phos-tag SDS-PAGE對于蛋白樣品中的雜質非常敏感,尤其是螯合劑,釩酸,無機鹽,表面活性劑這類物質。
強烈建議在Phos-tag SDS-PAGE之前通過TCA沉淀或滲析法降低雜質含量。

轉膜前處理:
另一個必須的步驟是在轉膜前,用EDTA去除凝膠中的金屬離子(Mn2+或者Zn2+); 該步驟可提高蛋白的轉膜效率。
  1. 分別準備10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 兩種1x transfer buffer。
  2. 將凝膠浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,至少20分鐘,溫和搖晃。更換新緩沖液,重復3次。
  3. 將凝膠浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,10分鐘,溫和搖晃。
  4. 轉膜操作*。
* 建議用濕法轉膜,以提高轉膜效率。
轉膜前處理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預制膠質量控制
每一批SuperSep Phos-tag™,出廠前均據產品規格進行測試,以保證可分離磷酸化和非磷酸化蛋白,且分離程度在正常參數內。
Phos-tag(TM)其它相關產品
相關資料
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