貨號：050-05941
測序級 谷氨酰蛋白內切酶
Endoproteinase Glu C, Sequencing grade
用于生物化學
CAS ：66676-43-5
EC編碼：3.4.21.19
EINECS編號：200-350-6
MDL編號：MFCD01324998
GHS ：警告
EC編碼：3.4.21.19
EINECS編號：200-350-6
MDL編號：MFCD01324998
GHS ：警告
谷氨酰蛋白內切酶簡介
使用蛋白酶裂解多肽鏈的條件較溫和，因此氨基酸殘基側鏈的修飾（氧化，鹵代，脫酰胺等）并不會發生，含有這些基團修飾（結合位點在碳水化合物鏈，脂類、磷酸酯，硫酸等）的多肽通常會以完整形式良好收率回收。在相同消解條件下，得到片段的重現性很好。蛋白質的一級結構分析使用高底物特異性的酶，因為從氨基酸組成可以大致預測片段數量及其平均大小。更重要的是，可以避免由于部分（非特異性）裂解導致分離復雜。
源自金黃色葡萄球菌V8的谷氨酰蛋白內切酶，是一種絲氨酸蛋白酶。其特異性取決于緩沖液和pH以及可能的切割位點周圍的結構。在乙酸銨（pH4.0）或碳酸氫銨（pH7.8），Glu-C切割谷氨酸的羧基端肽鏈。在磷酸緩沖液（pH7.8）中，Glu-C會切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽鏈。據報道Glu-C在0.2% SDS（十二烷基硫酸納）和4.0M尿素中有活性。
降解特異性：使用B鏈胰島素(insulin Box)作為底物反應1小時后的速率：≥85 %
谷氨酰蛋白內切酶性質
外觀：凍干粉末，不含鹽
來源：金黃色葡萄球菌 V8
生物活性：≥ 15u/mg 蛋白質
來源：金黃色葡萄球菌 V8
生物活性：≥ 15u/mg 蛋白質
谷氨酰蛋白內切酶應用
- 獲取表層蛋白（S-layer proteins, 來自嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC 12980）的蛋白水解片段，以進行親和研究。
- 酶切天然VSTx-3肽（voltage sensor toxin 3）以測定序列。
- 重組純化PimA（磷脂酰肌醇甘露糖轉移酶）的部分蛋白水解。
- 糖化血紅蛋白消解，用于液相-同位素稀釋質譜聯用分析。
谷氨酰蛋白內切酶產品列
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貨號
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產品
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包裝
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級別
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050-05941
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Endoproteinase Glu C, Sequencing grade
測序級 谷氨酰蛋白內切酶 Glu-C |
50ug
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生化試劑
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谷氨酰蛋白內切酶重組和蛋白酶活性：
- 碳酸氫銨緩沖液(pH 7.8) 或乙酸銨緩沖液 (pH 4.0): 該酶切割谷氨酸的羧基端肽鏈。
- 磷酸緩沖液 (pH 7.8): 該酶特異性切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽鏈。
特異活性：如標簽所示。
25℃下使用 Z-Phe-Leu-Glu-4-nitroanilide作為底物。
純度：單峰 (RP-HPLC)
純度：單峰 (RP-HPLC)
樣品： 20 μg谷氨酰蛋白內切酶
分離柱：Aquapore RP 300, 7 Fm 4.6H×100 mm.
溶劑A：水 (含0.1% 三氟乙酸)
溶劑B：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
梯度：30 分鐘 線性梯度 0-100％ B.
流速：0.5 ml/min.
檢測波長：215 nm
分離柱：Aquapore RP 300, 7 Fm 4.6H×100 mm.
溶劑A：水 (含0.1% 三氟乙酸)
溶劑B：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
梯度：30 分鐘 線性梯度 0-100％ B.
流速：0.5 ml/min.
檢測波長：215 nm
消解特異性：使用B鏈胰島素作為底物，消解反應開始1小時后反應速率大于等于85 %
①Pre (1)-Glu (13), ②Ala (14)-Glu (21), ③Arg (22)-Ala (30)
消解液：100μg B鏈胰島素＋10μg 谷氨酰蛋白內切酶溶于100μl碳酸銨緩沖液 (25 mmol/l, pH 7.8), 1 小時; 25℃
樣品：10 μl 消解液＋90 μl碳酸銨緩沖液
柱子：Aquapore RP 300, 7 μm 4.6φ×100 mm
分離條件:
溶劑：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
流速：0.5 ml/min
檢測波長：215 nm
樣品：10 μl 消解液＋90 μl碳酸銨緩沖液
柱子：Aquapore RP 300, 7 μm 4.6φ×100 mm
分離條件:
溶劑：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
流速：0.5 ml/min
檢測波長：215 nm
貯存條件：在2-10℃下保存。等份溶液保存在-20℃下。
包裝：50μg
包裝：50μg
谷氨酰蛋白內切酶參考資料
(1) Houmard, J. and Drapeau, G. R. ：Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 69, 3506 (1972)
(2) Drapeau, G. R. ：Can. J. Biochem ., 56, 534 (1978)
(3) Seetharama, R. and Seetharama, A., J. Cell. Biochem.,30, 87 (1986)
(2) Drapeau, G. R. ：Can. J. Biochem ., 56, 534 (1978)
(3) Seetharama, R. and Seetharama, A., J. Cell. Biochem.,30, 87 (1986)