貨號：056-05921
測序級 天冬酰蛋白內(nèi)切酶
Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade
用于生物化學(xué)
CAS：9001-92-7
EC編碼：3.4.24.33
EINECS編號：232-642-4
MDL編號：MFCD02253021
GHS : Danger
EC編碼：3.4.24.33
EINECS編號：232-642-4
MDL編號：MFCD02253021
GHS : Danger
天冬酰蛋白內(nèi)切酶簡介
使用蛋白酶裂解多肽鏈的條件較溫和，因此氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾（氧化，鹵代，脫酰胺等）并不會發(fā)生，含有這些基團修飾（結(jié)合位點在碳水化合物鏈，脂類、磷酸酯，硫酸等）的多肽通常會以完整形式良好收率回收。在相同消解條件下，得到片段的重現(xiàn)性很好。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)分析使用高底物特異性的酶，因為從氨基酸組成可以大致預(yù)測片段數(shù)量及其平均大小。更重要的是，可以避免由于部分（非特異性）裂解導(dǎo)致分離復(fù)雜。
天冬酰蛋白內(nèi)切酶 Asp-N 是一種金屬內(nèi)切蛋白酶。它來自于Pseudomonas fragi的一個突變菌株。這種酶專一地切割蛋白質(zhì)和多肽中天冬氨酸和半胱氨酸殘基的N末端。抑制劑：抑肽酶、二異丙基氟磷酸（DFP）、亮肽和TLCK。特異性：以胰高血糖素為底物1小時后的反應(yīng)率：≥90%。
天冬酰蛋白內(nèi)切酶性質(zhì)
外觀：凍干粉末
來源：Pseudomonas fragi 突變種
比活：使用偶氮骨膠原蛋白(azocoll)作為底物，在37℃下，≥20000 units/mg 蛋白質(zhì)
純度：≥90 % (SDS-PAGE)
來源：Pseudomonas fragi 突變種
比活：使用偶氮骨膠原蛋白(azocoll)作為底物，在37℃下，≥20000 units/mg 蛋白質(zhì)
純度：≥90 % (SDS-PAGE)
天冬酰蛋白內(nèi)切酶應(yīng)用
- 因其對多肽的高度特異性剪切，在蛋白質(zhì)組學(xué)中用于肽鏈分析和蛋白質(zhì)序列工作。
- 用于特定蛋白質(zhì)的消化以制備肽，并通過質(zhì)譜法分析生成的肽結(jié)構(gòu)。
天冬酰蛋白內(nèi)切酶產(chǎn)品列表
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貨號
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產(chǎn)品
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包裝
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級別
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056-05921
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Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade
測序級 天冬酰蛋白內(nèi)切酶 |
2ug
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生化試劑
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天冬酰蛋白內(nèi)切酶重組和蛋白酶活性：
重組：加入50μl無菌蒸餾水至10mmol/l Tris HCl緩沖液中溶解，pH7.5。
消解特異性：以胰高血糖素為底物，消解反應(yīng)1h后，反應(yīng)率達(dá)90%以上。
消解特異性：以胰高血糖素為底物，消解反應(yīng)1h后，反應(yīng)率達(dá)90%以上。
H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Y-L-D-S-R-R-A-Q-D-F-V-Q-W-L-M-N-T Glucagon
① Asp (15)-Gln (20), ② His (1)-Ser (8), ③ Asp (9)-Leu (14), ④ Asp (21)-Thr (29)
① Asp (15)-Gln (20), ② His (1)-Ser (8), ③ Asp (9)-Leu (14), ④ Asp (21)-Thr (29)
消解液：100μg胰高血糖素＋10μg測序級天冬酰蛋白內(nèi)切酶溶于磷酸鈉緩沖溶液 (50 mmol/l, pH 8.0) 1小時，37℃下培養(yǎng)18小時。
樣品：20 μl消解液
柱子：Shandon ODS Hypersil , 5 μm
分離條件：
溶劑A: Water (contain 0.1 vol% TFA)
溶劑B: Acetonitrile : H2O＝70 : 30 (contain 0.1vol% TFA)
梯度：20分鐘線性梯度0-100% B
流速：1 ml/min
檢測波長：215 nm
樣品：20 μl消解液
柱子：Shandon ODS Hypersil , 5 μm
分離條件：
溶劑A: Water (contain 0.1 vol% TFA)
溶劑B: Acetonitrile : H2O＝70 : 30 (contain 0.1vol% TFA)
梯度：20分鐘線性梯度0-100% B
流速：1 ml/min
檢測波長：215 nm
貯存：2-10℃。等份溶液長期保存應(yīng)置于-20℃凍存。貯存液在4℃可穩(wěn)定保存2天，在-20℃可保存至1個月。
包裝尺寸：2μg
包裝尺寸：2μg
天冬酰蛋白內(nèi)切酶參考資料
(1) Noreau. J. andDrapeau, G. R. : J. Bacteriol., 140, 911 (1979)
(2) Drapeau, G. R., : J. Biol. Chem., 225, 839 (1980)
(3) Laemmli, U. K., : Nature, 227, 680 (1970)
(2) Drapeau, G. R., : J. Biol. Chem., 225, 839 (1980)
(3) Laemmli, U. K., : Nature, 227, 680 (1970)