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2-AB多糖標記試劑盒

2-AB多糖標記試劑盒
  • 英文名：2-AB glycan labeling kits
  • 別名：
  • 級別：
  • 分子式：
  • 分子量：
  • 品牌：ludger
  • CAS：
  • 外觀：

產品簡介

LudgerTag? 2-氨基苯甲酰胺多糖標記試劑盒，貨號：LT-2AB-A2，包含經胺化還原反應使染料結合在多糖未結合還原端基的試劑，用于標記未結合多糖。

產品詳情

LudgerTag™ 2-AB（2-氨基苯甲酰胺）多糖標記試劑盒（貨號：LT-KAB-A2）包含經胺化還原反應使染料結合在多糖未結合還原端基的試劑，使用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）標記未結合多糖。
應用：用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）標記未結合多糖
染料性質
分子量 136.15
熒光 λex（染料） = 320 nm, λem = 420 nm
結構
2-AB (2-Aminobenzamide)
樣品數：通常每套標記試劑較佳情況下可分析15個獨立樣品。
樣品量：每個樣品含25pmol到25nmol多糖。
適合檢測的樣品：帶有未結合還原末端的純化聚糖，都可以進行標記。
結構完整性：未發現唾液酸、巖藻糖、硫酸鹽或磷酸鹽的損失（<2摩爾百分比）。
標記效率：通常大于85%（取決于樣品）。
標記選擇性：本質上是化學計量標記。
儲存：室溫下暗處儲存。遠離熱源、避光和防潮。所供試劑至少可穩定保存兩年。
運輸：該產品可在室溫下運輸。
處置：使用時涉及的玻璃或塑料器皿以及溶劑，應確保不含糖化酶及外源性碳水化合物。在所有樣品處理時，使用無粉末手套，避免受到外源性碳水化合物的污染。標記試劑設計的所有步驟都必須在干燥環境下操作，并使用干燥的玻璃和塑料器皿。一旦打開試劑瓶，應立即使用。多余試劑根據當地安全規則丟棄。
安全：僅供研究用。不得用于人體或藥用。請閱讀安全數據表（SDS）了解所有相關化學品。標記試劑涉及的操作，都應配備使用適當的個人安全保護裝置 - 眼鏡、耐化學性手套（如 腈類手套），以及在實驗室通風柜進行操作。
試劑盒組成
每個標記試劑盒包括1瓶以下試劑:
Cat. # Item Quantity
LT-2AB-01 2-AB染料 (2-氨基苯甲酰胺) 5 mg
LT-DMSO-01 二甲基亞砜 DMSO 350 μl
LT-ACETIC-01 冰醋酸 500 μL
LT-CYANOB-01 氰基硼氫化鈉(還原劑) 6 mg
所需的其他試劑和設備
  • 加熱模塊、爐或相近功能的干熱器（不能使用水浴），設定在65°C
  • 旋轉蒸發儀（例如Savant, Heto, 或其它）
  • 反應小瓶 (e.g. 聚丙烯 微量離心瓶)
  • 注：如果進行樣品標記后洗滌（參見樣品洗滌部分），則需要其它試劑。
標記操作時間線
LudgerTag 標記過程,加上可選樣品標記后洗滌，通常需要4-5個小時：
過程 時間 總時間（小時）
樣品轉移到反應瓶并干燥 30分鐘 0.5
配置并加入標記試劑 15分鐘 0.75
樣品和試劑一起培養 3 小時 3.75
標記后洗滌 1小時 4.75
還原性胺化
標記反應涉及一個兩步反應過程。 (見圖1):
1.希夫堿生成
具有未結合還原末端的多糖，其末端在閉環（有環）和開環（無環）狀態之間處于平衡狀態。染料的伯胺對無環還原端基殘基的羰基碳進行親核進攻，形成部分穩定的席夫堿。
2. 希夫堿還原
希夫堿亞胺基通過化學還原生成穩定標記的多糖。
2-AB標記多糖反應機理
圖1:通過還原性胺化反應，用2-氨基苯甲酰胺標記多糖
標記操作概述
LudgerTag 多糖標記試劑盒，用于熒光或發色標記帶有為結合還原端基的多糖。在所中色譜和結構序列分析中，經標記的多糖既可以進行高靈敏度熒光檢測，也可以進行紫外吸收監測，包括使用LudgerSep液相色譜柱的色譜分析和使用外切糖苷酶的序列分析（參見 參考1-5, 7)。
標記過程概述如下：
1 多糖準備
準備多糖樣品，去除類似鹽和洗滌劑等可能干擾標記過程的污染物。
2 多糖干燥
將樣品置于反應小瓶中干燥。
3 標記試劑準備
將試劑盒中相關試劑混合制備新鮮的染料標記溶液。
4 將標記試劑加入多糖中
將小量的標記溶液加入每一份多糖樣品中
5 培養
培養樣品使標記反應進行下去。
6 標記后洗滌
培養完成后，如有必要（根據后續分析過程而定），直接進入洗滌流程以去除過量的標記試劑。.
7 經標記的多糖儲存或者分析
經標記的多糖樣品現在可以用于分析了。
樣品準備
要進行標記的多糖樣品，無論是純化的或是多糖混合物，必須包含未結合的還原端基，顆粒狀且不含無機鹽，并溶于易揮發的溶劑體系中（建議是純水）。
下列物質可能干擾標記反應，必須在進行LudgerTag™ 標記之前，事先從多糖樣品中去除：
不揮發溶劑
不揮發鹽，尤其是過渡金屬離子
洗滌劑
染料和染色劑，例如考馬斯藍
Ludger提供了一系列LudgerClean™試劑盒，用于在Ludgertag™標記之前洗滌多糖樣品。這些內容在LudgerClean多糖洗滌指南[參考6]中有詳細說明。
標準樣品制備概述如下：
1 多糖純化
如有必要，從樣品中按照多糖洗滌指南[參考6]中所述去除非碳水化合物污染物。
2 將樣品轉移至反應小瓶中
從典型糖蛋白中獲得的多糖，樣品量應在100個皮摩爾-50納米摩爾的范圍內。單一的純多糖，即使僅有5皮摩爾的量，也可以被標記，并在之后高效液相色譜分析中檢測出。適用的反應小瓶，包括小型聚丙烯微離心管和可用于PCR操作的試管。
3 樣品干燥
理論上，應使用旋轉蒸發器干燥樣品。如果條件不允許，可以小心使用冷凍干燥（尤其要確保在小瓶的底部的樣品，凍干成小而致密的物質）。 不要將樣品置于高溫（>28℃）或極端pH環境下，因為這樣會導致唾液酸在酸催化下耗損（高溫、強酸），或多糖還原端的異構反應（強堿）。
標記試劑準備
按如下過程制備新鮮標記試劑：
4 制備DMSO-醋酸混合液
150μl冰醋酸加入盛有DMSO的小瓶中，并用移液器抽吸混合。
冰醋酸和DMSO的貨號分別為LT-ACETIC-01和 LT-DMSO-01。
小心敲擊安瓿瓶以震落附著安瓿上半部的內容物，然后小心打開安瓿瓶。
如果DMSO凍成固體，在烘箱或加熱快上在30-65℃之間緩慢加熱小瓶（在啟封前）。
5 加入染料
將100μl DMSO-醋酸混合液加入LudgerTag™ 2-AB (2-氨基苯甲酰胺) 染料小瓶中，混合直至染料全部溶解。
染料貨號為LT-2AB-01。
6 加入還原劑
將溶解的染料加入盛有LudgerTag™ 氰基硼氫化鈉 (還原劑) 的小瓶中，使用移液器抽吸混合直至還原劑全部溶解形成最終的標記試劑。
氰基硼氫化鈉還原劑的貨號是LT-CYANOB-01。
如果還原劑難以溶解，那么在65℃的恒溫培養箱中，或者加熱塊上，輕緩地加熱至多4分鐘。如還原劑仍未全溶，補加10μl純水并混合均勻。
標記試劑應防潮，并在配置60分鐘內使用。
標記反應
7 將標記試劑加入樣品
將5μl標記試劑加入到每一份經干燥的多糖樣品中，蓋上離心管，徹底混合，然后輕輕敲擊以確保標記溶液位于小瓶的底部。
8 培養
將反應小瓶放在65℃的加熱塊、砂浴或烘箱中，培養3小時。
培養必須在干燥的環境下進行。請使用培養箱或干燥塊，請務必不要使用水浴。
樣品必須全部溶解在標記溶液中，才能有效進行標記。為了促進全部溶解，樣品可在培養溫度達到65℃后渦旋混合30分鐘，然后繼續培養。
在大多數情況下，培養時間可以縮短至2小時或延長至4小時，而不會顯著改變標記反應結果。
9 離心并冷卻
培養結束后取出樣品，短暫離心微量試管，并讓其全部冷卻至室溫。
LudgerClean™ S 標記后樣品洗滌
對于特定的應用 - 例如后續的HPLC分析，標記后的樣品洗滌(去除多余的染料和其它標記試劑) 是必不可少的。使用LudgerClean™ S 小柱 (貨號 LC-S-Ax, 此處x代表試劑盒中小柱的數量)按試劑盒所附標準操作程序可以完成樣品洗滌。
對于過量標記試劑不會影響后續樣品分析的應用而言，樣品標記后洗滌并非必需。這些分析手段包括碳水化合物電泳，游離染料會從標記多糖條帶處分離開。
LudgerTag™ 2AA標記多糖的分析
LudgerTag™ 2-AB標記多糖可通過一系列分析方法進行研究，包括HPLC，凝膠電泳和質譜。 這些會在參考資料8里詳細敘述，在下文也有概述。
高壓液相色譜分析
LudgerTag™ 2-AB標記多糖混合物可以通過一系列HPLC（高壓液相色譜）方法進行分離和分析，也包括LudgerSep HPLC:

    
        

            
            
分析類型

            		
            
            
柱子

            		
            
            
貨號

            		
        

        

            
            
帶電荷和中性多糖的分離

            		
            
            
LudgerSep™ C

            		
            
            
LS-C-01

            		
        

        

            
            
帶電荷和中性多糖的剖面分析

            		
            
            
LudgerSep™ N

            		
            
            
LS-N-01

            		
        

        

            
            
中性多糖的分離

            		
            
            
LudgerSep™ R

                

            
        
        
        
        
        
         
        
        

            
我要下單

            
    
                
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