質(zhì)譜級(jí) 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶
Lysyl Endopeptidase
Lysyl Endopeptidase
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lysyl Endopeptidase）初期由Masaki等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該酶可以特異性剪切除賴(lài)氨酸殘基C末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X 化合物的酶催化合成。作為Wako官方授權(quán)分銷(xiāo)商，西寶生物專(zhuān)業(yè)提供Wako多種級(jí)別賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，該酶穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。訂購(gòu)熱線(xiàn)：400-021-8158
質(zhì)譜級(jí)賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶。若同時(shí)使用賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶，可更好地切斷賴(lài)氨酸基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。
質(zhì)譜級(jí) 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 理化特性
Lysyl Endopeptidase
Lysyl Endopeptidase
表1賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶理化特性表
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外觀
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凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl buffer，pH 8）
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活性
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0.03~0.07AU/vial
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分子量
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27,000（凝膠過(guò)濾）；30,000 (SDS-PAGE)
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溶解性
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易溶于水或緩沖液
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較佳pH
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9.0-9.5（酰胺酶的較佳活性pH）
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等電點(diǎn)
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6.9-7.0
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抑制劑
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DFP、PMSF、TLCK
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來(lái)源
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細(xì)菌
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穩(wěn)定性
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溶于pH 值5.0-12.0 的Tris緩沖液中，可于4℃穩(wěn)定保存2年。溶于pH 值6.0-11.0 的緩沖液中，可于30℃穩(wěn)定保存，但是50℃及以上不穩(wěn)定。
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單位定義
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一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生1 μmol 對(duì)硝基苯胺所需的酶量。
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底物特異性
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水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
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非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA
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質(zhì)譜級(jí) 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 產(chǎn)品特點(diǎn)
Lysyl Endopeptidase
Lysyl Endopeptidase
- 高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析
- 提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
- 根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用
質(zhì)譜級(jí) 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 應(yīng)用實(shí)例
Lysyl Endopeptidase
Lysyl Endopeptidase
分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶(Lep) 和Tp 與Lep聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較：牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過(guò)SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lep 和Lep+Tp 進(jìn)行酶切，再用MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果如下表：
表2 Tp、Lep 和 Lep+Tp 的蛋白酶酶切結(jié)果對(duì)照
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Tp
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Lep
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Lep +Tp
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裂解位點(diǎn)
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精氨酸和賴(lài)氨酸的C端
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賴(lài)氨酸的C端
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精氨酸和賴(lài)氨酸的C端
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錯(cuò)誤裂解率
(錯(cuò)誤裂解所占比例) |
多(8%)
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很少(0%)
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少(3%)
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鑒定出的多肽數(shù)量
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17
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19
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22
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結(jié)果表明 Lep 酶解的錯(cuò)誤裂解率低，Tp酶解時(shí)加入Lep后，錯(cuò)誤裂解率有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。
圖1 胰蛋白酶 (Tp)(圖 a) 和賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lep)+Tp (圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。
Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒(méi)有吸收峰。該結(jié)果表明Lep可以提高測(cè)序覆蓋度。
( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )
質(zhì)譜級(jí) 賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 產(chǎn)品列表
Lysyl Endopeptidase
Lysyl Endopeptidase
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品描述
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產(chǎn)品規(guī)格
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Lysyl Endopeptidase, MS Grade
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí) for Proteome Research |
20μgx5
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Lysyl Endopeptidase (R)
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 for Biochemistry |
1vial(2AU)
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Lysyl Endopeptidase (R)
賴(lài)氨酰肽鏈內(nèi)切酶 for Biochemistry |
1vial(10AU)
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