步驟1.目標基因全基因合成:
提供給客戶:目標基因(在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。
價格:3.80元/堿基,如果客戶直接提供構建好的質粒,則免去這部分費用.
時間:2~3周,根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務
步驟2.目標基因亞克隆:
- 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
- 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
- 測序驗證構建質粒的準確性。
- 閃晶生物免費提供如下表達載體:
提供給客戶:正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
價格:免費
時間:1-2周
步驟3.E. coli表達菌株轉化及篩選:
- 擴增并抽提構建好的表達質粒。
- 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
- 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
- SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
- 可提供表達菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供給客戶:重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。
價格:免費
時間:1周
步驟4.目標蛋白表達及純化:
- 搖瓶培養1L重組細菌,誘導表達目標蛋白。
- 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
- 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽,再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點)。
- 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制產品質量。
- 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供給客戶:純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。
價格:
1. 如果目標蛋白含有親和標簽(His-tag or GST-tag)
5,000元(目標蛋白純度>80%,不切除標簽)
5,500元(目標蛋白純度>90%,不切除標簽)
6,000元(目標蛋白純度>80%,切除標簽)
6,500元(目標蛋白純度>90%,切除標簽)
2. 如果目標蛋白不含有親和標簽
8,000元(目標蛋白純度>80%)
9,000元(目標蛋白純度>90%)
3. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取其它費用(僅限客戶直接提供構建好的質粒時)。
時間:2~3周,蛋白表達訂單下載
備注:
1. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們終根據實際情況將給客戶提供1mg-10mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。
2. 我們提供的產品一般為保存于常規的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。
3. 每次Western blot檢測多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。詳見Western Blot檢測服務.