狂犬病作為危害人類健康的古老的疾病之一，流行于世界大多數的國家和地區。據統計，每年都有不少于4000人死于狂犬病發作。狂犬病疫苗作為對抗狂犬病的有效方法也隨之經歷了漫長的發展過程。目前世界上存在很多狂犬病疫苗的生產技術，可以應用細胞毒株制備狂犬病地鼠腎細胞純化疫苗。將狂犬病CaG株在原代地鼠腎細胞傳代適應，用病毒培養液上清作為產生用毒種，結果通過在地鼠腎細胞傳10代左右，適應后病毒液度較高。
1生產流程
細胞制備 →種子批建立→種子檢測→病毒接種和培養→病毒收獲
→病毒滅活→合并、濃縮、純化→原液檢定→分裝及凍干
2主要流程簡單說明
2.1細胞制備
生產用細胞為原代地鼠腎細胞或連續傳代不超過5代的地鼠腎細胞。
選用12—14日齡地鼠，無菌取腎，剪碎，經胰蛋白酶消化，分散細胞，接種培養瓶，
用適宜的培養液進行培養。來源于同一批地鼠、同一容器消化制備的地鼠腎細胞為一個
細胞消化批。源自同一批地鼠、于同一天制備的多個細胞消化批為一個細胞批。培養液為含適量滅活小牛血清和乳蛋白水解物的MEM，199或其他培養液。
2.2種子批的建立
生產用毒種為狂犬病病毒固定毒aG株或其他經地鼠細胞適應的狂犬病病毒固定毒株。原始種子批為2aG1，主種子批應不超過4aG。毒種在地鼠腎原代細胞和豚鼠腦內交替傳代制備工作種子批，在地鼠腎原代細胞的傳代應不超過第6代，即不超過10aG；在豚鼠腦內傳代應不超過第5代，即10aG5。
2.3種子檢測
用小鼠腦內中和試驗鑒定毒種的特異性。將毒種作10倍系列稀釋，取適宜稀釋度病毒液與等量狂犬病病毒特異性免疫血清混合，同時設立正常血清對照組，試驗組與對照組的每個稀釋度分別接種11-13g小鼠6只，每只腦內接種0.03ml，觀察14天，中和指數應不低于500。
取毒種作10倍系列稀釋，每個稀釋度腦內接種體重為11-13g小鼠至少6只，只腦內接種0.03ml，觀察14天，病毒滴度應不低于8.0LgLD50/ml。
用主種子批毒種制備滅活疫苗，腹腔注射體重為12-14g小鼠，每只0.5ml。7天后重復接種1次作為試驗組，未經免疫小鼠做對照組。第一次免疫后的第14天，試驗組和對照組分別用10倍系列稀釋的CVS病毒腦腔攻擊，每只0.03ml，每個稀釋度10只小鼠。保護指數應不低于100。
2.4病毒接種和培養
當細胞培養成致密單層后，毒種按0.01－0.1MOI接種（同一工作種子批應按同一MOI接種），置適宜溫度下培養一定時間后，棄去培養液，用無菌PBS或其他適宜洗液沖洗去除牛血清，加入適量維持液，置33-35℃繼續適當時培養間。
2.5病毒收獲
經培養適宜時間收獲病毒液，即為病毒單次收獲液。根據細胞生長情況，可換以維持液進行多次病毒收獲。同一細胞批的同一次病毒收獲液經檢定合格后可合并為單次病毒收獲液。
2.6病毒滅活
病毒收獲液中按1：4000的比例加入甲醛溶液（應在規定的蛋白濃度范圍內進行病毒滅活），置適宜溫度、在一定時間內滅活病毒。病毒滅活到期后，每個滅活容器應立即取樣，分別進行病毒滅活驗證試驗。
2.7合并、濃縮、純化
同一細胞批制備的多個單次病毒收獲液檢定合格后可合并為一批，經超濾或其他適宜方法濃縮至規定的蛋白質濃度范圍。經濃縮后的病毒液采用柱色譜法或其他適宜的方法純化。純化后可加入適量人血白蛋白作為穩定劑，即為原液。
3總結
通過對狂犬病毒aG株在金黃地鼠腎細胞上傳代培養,獲得一種新型狂犬病毒毒株,即地鼠腎細胞適應株(CaG株)。由于該毒種具有生產方法簡單,成本低廉,且外源因子污染機率小等優點,因此試用該毒種生產精制狂犬病疫苗。相同條件下,分別用豚鼠腦毒種和細胞毒種各生產3批病毒原液,經相同純化工藝制備成精制狂犬病疫苗。經初步檢定用細胞毒種制備的疫苗安全性良好,疫苗免疫效價與豚鼠腦毒種疫苗無明顯差異。
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