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FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖

來(lái)源:作者:人氣:-發(fā)表時(shí)間:2020-05-27 13:38:00【
TdB葡聚糖衍生物
FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖
Chemical names: FITC-羧甲基-葡聚糖;Fluorescein- thiocarbamoyl-(O-carboxymethyl)-dextran
Trade name: FITC-CM-dextran
FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖是帶有羧甲基取代基的FITC標(biāo)記葡聚糖。為了研究細(xì)胞和細(xì)胞膜,開(kāi)發(fā)了FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖。羧甲基基團(tuán)使產(chǎn)品帶有負(fù)電荷。檢查每個(gè)批次的分子量,取代度,干燥失重和游離FITC。TdB生產(chǎn)分子量范圍從4KDa到150KDa的 FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖。 FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖呈橙黃色粉末。
結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖是由選定的葡聚糖組分與活化的羧甲基衍生物在堿性條件反應(yīng)制備,O-羧甲基基團(tuán)也因此被接到糖鏈上。羧甲基的含量大約是5%,相當(dāng)于每5個(gè)葡萄糖單元上接1個(gè)羧甲基基團(tuán)。然后,通過(guò)和熒光素異硫氰酸酯反應(yīng),接入熒光素(FITC)基團(tuán)。FITC的取代度在0.003–0.008之間。FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖呈橙黃色粉末,極易溶于水或電解質(zhì)溶液。由于具有負(fù)電荷的羧基基團(tuán),該產(chǎn)品具有明顯的聚陰離子性能。FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖的溶液性質(zhì)與羧甲基葡聚糖性質(zhì)相當(dāng)(1-3)。在中性溶液中,羧甲基取代基相互排斥,導(dǎo)致葡聚糖鏈膨脹。FITC-CM葡聚糖不溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑,例如乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯。
圖 1. FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖的結(jié)構(gòu)式
圖 1. FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖的結(jié)構(gòu)式
賴氨酸葡聚糖 (or Dextran-lysine-fixable) 是由來(lái)自腸系膜白串珠菌的葡聚糖的特定片段通過(guò)賴氨酸標(biāo)記而合成的。然后用FITC在溫和條件下功能化得到FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖。經(jīng)純化,控制產(chǎn)品的分子量,外觀,溶解度,取代度,pH,游離賴氨酸和游離FITC。產(chǎn)品的分子量是由對(duì)應(yīng)的葡聚糖片段的相近分子量來(lái)確定的。例如,F(xiàn)ITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖4的分子量大約為4000 Da。實(shí)際分子量是通過(guò)GPC測(cè)定的。葡聚糖來(lái)源于腸系膜白串珠菌B-512F,由α-D-(1-6)線性葡聚糖組成, α-(1-3) 側(cè)鏈含量較低(2-5%)。葡聚糖的分子量范圍從4000 到500000,并且通過(guò)GPC,比旋,吸光率和其它參數(shù)嚴(yán)格控制質(zhì)量。
圖2   FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖在0.025M硼酸鹽緩沖溶液(10mg溶于50 ml緩沖液pH9.0)的熒光圖譜。激發(fā)波長(zhǎng)493nm;發(fā)射波長(zhǎng)519nm
圖2. FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖在0.025M硼酸鹽緩沖溶液(10mg溶于50 ml緩沖液pH9.0)的熒光圖譜。
激發(fā)波長(zhǎng)493nm;發(fā)射波長(zhǎng)519nm
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
已開(kāi)展的穩(wěn)定性預(yù)期研究證實(shí),羧甲基葡聚糖至少在3年內(nèi)保持其效力和純度(未發(fā)表的研究)。根據(jù)我們對(duì)FITC標(biāo)記葡聚糖的經(jīng)驗(yàn),推測(cè)FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖具有類似的穩(wěn)定性。建議將FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖儲(chǔ)存在密閉容器中,在室溫下避光保存,可保存6年。
應(yīng)用
FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖主要用于滲透性和微循環(huán)研究。羧基賦予分子一個(gè)負(fù)電荷,這或有助于獲取細(xì)胞膜和組織滲透特性信息。游離羧基也可用于將其他物質(zhì)與葡聚糖鏈偶聯(lián)。
羧甲基葡聚糖被發(fā)現(xiàn)具有生物相容性,用作一些藥物和診斷應(yīng)用的起始原料。FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖的毒性預(yù)期很低。在葡聚糖鏈中接入羧基,為將具備有趣生物活性的分子(藥物、酶、診斷示蹤劑)固定在葡聚糖上提供了進(jìn)一步機(jī)會(huì)。羧基部分可用于許多反應(yīng),例如酯化、和胺發(fā)生酰胺化、UGI反應(yīng)或Passerini反應(yīng)。簡(jiǎn)單的離子結(jié)合反應(yīng)也可以提供一系列包含不同陽(yáng)離子分子(4,5)的衍生物。羧基還將賦予分子整體負(fù)電荷,這可能有助于獲得有關(guān)細(xì)胞膜和組織的滲透特性的信息(6)。FITC標(biāo)記羧甲基葡聚糖在藥物傳遞系統(tǒng)研究中的應(yīng)用也見(jiàn)諸報(bào)道(7)。
產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào)
品名
分子量(kDa)
包裝
FITC-CM-dextran 4
4
100 mg
1 g
FITC-CM-dextran 20
20
100 mg
1 g
FITC-CM-dextran 40
40
100 mg
1 g
FITC-CM-dextran 70
70
100 mg
1 g
FITC-CM-dextran 150
150
100 mg
1 g
參考文獻(xiàn)
1. K. Gekko, Solution properties of dextran and its ionic derivatives, ACS Symposium Series, 150(1981), 415-438.
2. K. Gekko and H. Noguchi, Selective interaction of calcium and magnesium ions with ionic dextran derivatives, Carbohydr Res, 69(1979), 323-326.
3. O.Smidsröd and A.Haug, Estimation of the relative stiffness of the molecular chain in polyelectrolytes from measurements of viscosity at different ionic strengths, Biopolymers, 10(1971), 1213-27.
4. P. Rongved and J. Klaveness, Water soluble polysaccharides as carriers of paramagnetic contrast reagents for magnetic resonance imaging; Synthesis and relaxation properties, Carbohydr Res, 214(1991), 315-323.
5. S.W Zheng, M. Huang et al., RGD-conjugated iron oxide magnetic nanoparticles for magnetic resonance imaging contrast enhancement and hyperthermia, magnetic resonance imaging contrast enhancement and hyperthermia, J Biomater Appl, 28(2014), 1051-1059.
6. D. Asgiersson, D. Venturoli, B. Rippe and C. Rippe, Increased glomerular permeability to negatively charged polysucrose relative to neutral polysucrose in rats, Am J Physiol Renal Physiol, 291(2006), F1083-9.
7. C. Martin, E .Dolmazon, K. Moylan et al., A charge neutral tuneable polymersome capable of high biological encapsulation efficiency and cell permeation, Int J Pharmaceutics, 481(2015), 1-8.
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