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GenomONE(R) 仙臺病毒包膜細(xì)胞融合試劑 - GenomONE(R) -CF EX

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2024-02-18 09:16:00【大中小】

GenomONE^® 仙臺病毒包膜細(xì)胞融合試劑

GenomONE^® -CF EX

GenomONE^®-CF EX 含有仙臺病毒包膜和專用緩沖液，可促使細(xì)胞融合。

適用于貼壁/懸浮狀態(tài)的所有細(xì)胞，僅需 30 min，即可制備融合細(xì)胞和雜交瘤。

◆ 用途

● 制備雜交瘤

●　應(yīng)用于癌細(xì)胞與樹狀細(xì)胞融合的癌癥免疫研究

●　應(yīng)用于內(nèi)臟來源細(xì)胞與干細(xì)胞融合的再生醫(yī)療研究

●　應(yīng)用于去核未受精卵的核移植等的發(fā)育、繁殖和育種研究

●　替代電融合法、PEG 法

◆ HVJ Envelope（HVJ-E）：

HVJ 包膜（HVJ-E）是完全滅活和純化仙臺病毒（HVJ*），即只留下細(xì)胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺病毒的HN蛋白可與細(xì)胞膜外的唾液酸受體結(jié)合，通過Ｆ蛋白的作用，引起細(xì)胞膜融合。在 HVJ-E 中，仙臺病毒的基因組 RNA 已經(jīng)完全失活，在人類和實驗動物體內(nèi)不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設(shè)備，它可以安全地在普通的實驗室使用。

*HVJ：日本仙臺病毒

◆ HVJ-E 細(xì)胞融合原理

在低溫（0 - 8℃)條件下，每一個細(xì)胞與數(shù)百個以上的 HVJ - E 接觸，HVJ - E 與細(xì)胞膜上的唾液酸受體結(jié)合，通過細(xì)胞表面吸附（步驟１），細(xì)胞通過 HVJ-E 相互連接（步驟２），形成細(xì)胞彼此聚集的狀態(tài)。當(dāng)該細(xì)胞/HVJ-E 的復(fù)合物加熱到 37℃ 時，細(xì)胞膜干擾就會進(jìn)一步擴(kuò)大，細(xì)胞膜內(nèi)膜結(jié)構(gòu)也暫時改變。這種變化是短暫的，隨后會立即返回到正常結(jié)構(gòu)，但是在這個期間，細(xì)胞膜利用強疏水性結(jié)合力進(jìn)行相互融合（步驟３）。

步驟一	步驟二	步驟三

◆ 應(yīng)用方法

懸浮法	電融合法

◆ 懸浮細(xì)胞融合案例

同種細(xì)胞融合

異種細(xì)胞融合

熒光標(biāo)記的紅（* 1）細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記（* 2）細(xì)胞（每1.0×10⁵個）在融合緩沖液 50 μL 混合后，加入 HVJ-E 冰敷５分鐘，隨后 37℃ 下反應(yīng) 15 分鐘后，融合細(xì)胞（黃色）進(jìn)行了觀察。

◆ 黏著態(tài)和懸浮態(tài)細(xì)胞融合案例

在粘合狀態(tài)BHK-21（紅）和在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

膠粘狀態(tài)的HeLa S3（紅）在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

熒光標(biāo)記的（* 1）中的紅，附著的細(xì)胞在 12 孔平板，綠色熒光標(biāo)記（* 2）中，添加預(yù)先準(zhǔn)備的 HVJ-E，來處理漂浮細(xì)胞１×10⁵個的懸浮液（融合緩沖污染），并在室溫下離心（1000轉(zhuǎn)），每個板５分鐘。隨后孵育37℃15分鐘后，更換增殖用的培養(yǎng)基繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)。觀察３個小時后的融合細(xì)胞（黃色）。

◆ 和 PEG 法的比較

紅色熒光標(biāo)志(* 1）的 ratMSC（骨髓由來老鼠間葉系細(xì)胞）和綠色熒光標(biāo)識的老鼠原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞２×10⁵個融合緩沖液 50 μL 中混合后，添加 HVJ – E，冰浴５分鐘，然后 37℃ 孵育反應(yīng)15分鐘，觀察融合細(xì)胞（黃色）。１-２日培養(yǎng)后，觀察到粘著的融合細(xì)胞。在 PEG 法中融合緊接之后細(xì)胞毒性強烈，融合細(xì)胞的數(shù)量很少。

◆安全性說明

HVJ-E 失活的確認(rèn)（確認(rèn)無感染性病毒的存在）

1.	細(xì)胞增值實驗（熒光灶單元（FFU）法）處理 LLC-MK2 細(xì)胞，一到兩天后，病毒生長性的 HVJ 融合蛋白F抗體通過熒光抗體法測定，已證實未檢測到病毒蛋白。<制造階段實驗>
2.	受精卵生長試驗（血凝單位測定）處理受精卵，３天后的病毒增殖，包括在 HVJ 表面的 HN 蛋白的紅血細(xì)胞聚合活性（HAU）測量作為指標(biāo)，已經(jīng)證實，沒有看到病毒的生長。<制造階段實驗>
3.	小鼠感染性研究鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠（SIX周）在相同籠中飼養(yǎng)，通過測定血清中的抗 HVJ 抗體滴度進(jìn)行了個體之間感染性的檢測。其結(jié)果是，在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加，表明未感染 HVJ-E。
4.	動物個體的遺傳基因?qū)雽嶒?/strong> 小鼠、大鼠等實驗動物的各種藥物實驗（肺、氣管、肝和靜脈等）。已證實完全沒有病毒感染或是可疑的事例。

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
388-18721	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細(xì)胞融合試劑	1 set
384-18723	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細(xì)胞融合試劑	4 sets
382-18724	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細(xì)胞融合試劑	16 sets