一網打盡內毒素/細菌/真菌檢測

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-09-13 16:01:00【大中小】

一網打盡內毒素/細菌/真菌檢測

- 細菌內毒素檢測（鱟試劑）

一、細菌內毒素檢測背景

內毒素是一種脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），來源于革蘭氏陰性細菌外膜，其細胞壁外膜的外部脂質成分由內毒素分子組成，細胞死亡或分解后被釋放出來。它是一種典型的熱原，即使皮克級或納克級的內毒素進入血液也會引發發熱等生物反應。

二、細菌內毒素的檢測方法

細菌內毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素,以判斷供試品中細菌內毒素的含量是否符合規定的一種方法。美國，歐洲和日本的藥典中包含了三種內毒素檢測方法，分別是凝膠法、顯色法和濁度法。

三、WAKO 內毒素檢測方法選擇

凝膠法和動態濁度法通用系列PYROSTAR™ ES-F

凝膠法：定性或半定量檢測內毒素，無需檢測儀器。

動態濁度法：配合FUJIFILM Wako內毒素檢測儀（如Toxinometer® ET-7000），定量檢測內毒素，適合檢測干擾較小的樣品。修改為多次性鱟試劑可配合客戶的動力學酶標儀或FUJIFILM Wako內毒素檢測儀（如Toxinometer® ET-7000），定量檢測內毒素，適合檢測干擾較小的樣品。

FDA認證
特異性檢測 不受（1→3）-β-D-葡聚糖的影響
檢測范圍廣 0.001-10 EU/mL（動態濁度法）
準確可靠 各批次靈敏度經美國RSE標定

多次型

產品編號	產品名稱	產品規格	凝膠法靈敏度	動態濁法檢測范圍	是否含內毒素標準品
548-10141	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),0.015EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),0.015 EU/mL	2mL×4	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	是
541-10131	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.03 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.03 EU/mL	2mL×4	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
545-10151	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.06 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.06 EU/mL	2mL×4	0.06 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
542-10161	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),0.125EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),0.125EU/mL	2mL×4	0.125 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
549-10171	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.25 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.25 EU/mL	2mL×4	0.25EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
543-10071	PYROSTAR ES-FM ULTIKIT(5.2mL),0.015 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型5.2mL),0.015EU/mL	5.2mL×4	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	是
542-10041	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(5.2mL),0.03EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),0.03EU/mL	5.2mL×4	0.03 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
547-10111	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2 mL),0.06 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),0.06 EU/mL	5.2mL×4	0.06EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
544-10121	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2mL),0.125 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2 mL),0.125EU/mL	5.2mL×4	0.125 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
549-10051	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2 mL),0.25EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),0.25 EU/mL	5.2mL×4	0.25 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
546-10201	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.015EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),大包裝，0.015 EU/mL	2mL×100	0.015 EU/mL	0.001-10EU/mL	否
546-10181	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.03 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包裝，0.03EU/mL	2mL×100	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	否
543-10191	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.06 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包裝，0.06EU/mL	2mL×100	0.06 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
540-10221	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(2mL),BULK,0.125EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),大包裝，0.125EU/mL	2mL×100	0.125 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
543-10211	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.25 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包裝，0.25EU/mL	2mL×100	0.25EU/mL	0.01-10EU/mL	否
547-10231	PYROSTAR ES-FMULTIKIT(5.2 mL),BULK,0.015 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),大包裝，0.015EU/mL	5.2mL×100	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	否
544-10241	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.03EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包裝，0.03 EU/mL	5.2mL×100	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	否
541-10251	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.06 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包裝，0.06 EU/mL	5.2mL×100	0.06EU/mL	0.01-10EU/mL	否
548-10261	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2mL),BULK,0.125 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包裝，0.125 EU/mL	5.2mL×100	0.125 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
545-10271	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.25EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),大包裝，0.25 EU/mL	5.2mL×100	0.25EU/mL	0.01-10EU/mL	否

單次性

產品編號	產品名稱	產品規格	凝膠法靈敏度	動態濁法檢測范圍	是否含內毒素標準品
295-72301	PYROSTAR ES-F Single Test,0.015 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 獨立分裝，0.015EU/mL	25 tests	0.015 EU/mL	0.001-10EU/mL	是
292-81601	PYROSTAR ES-F Single Test,0.03 EU/mL 鱟試劑PYROSTAR ES-F, 獨立分裝，0.03 EU/mL	25 tests	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	是

◆ 適用于動態顯色法：Color KY 系列

配合FUJIFILM Wako內毒素檢測儀（如Toxinometer® ET-7000）或酶標儀，高靈敏度定量檢測，適合檢測干擾性強的樣品。

產品編號	產品名稱	產品規格	靈敏度	檢測范圍	是否含內素標準品
291-53101	Limulus ColorKY Test Wako 鱟試劑Color KY多次型	60 tests	低至0.0005 EU/mL	0.0005-5 EU/mL	是
291-53601	Limulus ColorkY Single Test Wako 鱟試劑Color KY獨立分裝	25 tests	低至0.0002 EU/mL	0.0002-5 EU/mL	是

◆ 內毒素檢測儀 Toxinometer® ET-7000

支持中國藥典中的三種檢測方法：濁度法、顯色法、凝膠法；
支持美國 / 歐洲 / 日本藥典的BET（細胞內毒素檢測）；
符合FDA21 CFR Part 11標準，滿足數據完整性；
可同時測量16個樣本，每個孔位獨立檢測，并可實時跟蹤數據；

產品編號	產品名稱	包裝
299-35821	Toxinometer ET-7000/E Er/Es Set（套裝組成） Toxinometer ET-7000/E（1臺） Toximaster® QC8 ER/ES（可供5臺電腦使用）計算機（1臺） Toximaster® QC8 ER/ES驗證資料（1份）	1 set
296-35831	Toxinometer ET-7000/E標準套裝（套裝組成） Toxinometer ET-7000/E（1臺） Toximaster® QC7 計算機（1臺）	1 set

產品編號	產品名稱	包裝
292-35811	Toxinometer ET-7000/E※ Toxinometer ET-7000/E增設用模塊	1臺
295-33461	Toxinometer ET-7000 Rack Toxinometer ET-7000專用支架	1臺

※本產品為上述各個套裝增設的檢測儀器。注）本品不可單獨進行檢測。

四、檢測注意事項

4.1對檢測用具的要求

用于內毒素檢測的所有檢測用具必須不含內毒素和β-葡聚糖。為使內毒素失活，需要在250°C下干熱處理超過30 min。建議使用經干熱滅菌的玻璃器皿。避免使用金屬工具，因為即使有少量被洗脫出的金屬離子（例如鐵，鋁，鎵，鉻），也可能影響測試。而當使用一次性塑料工具（其制造商未能保證其能用于檢測用途）時，檢查它們是否滿足以下要求（與玻璃器皿相比）：1）未被內毒素污染;2）不吸附內毒素;3）無洗脫物。

4.2內毒素標準品

根據檢測目的使用適當類型的內毒素標準品。

•需符合BET（美國藥典/ 歐洲藥典 / 日本藥典）的檢測，例如藥品和醫療器械的產品最終檢驗必須使用美國藥典，歐洲藥典或日本藥典標準的內毒素國家標準品。

•對材料，工藝流程和其他相關主題的檢測可以使用內毒素工作標準品（CSE）。

4.3 樣本干擾

有時候需要采取預防措施，以防止樣本對內毒素檢測有潛在影響（反應干擾）。這些干擾分為以下兩種類型：

（1）對LAL試劑的干擾

•蛋白變性劑（例如酸，堿，尿素，表面活性劑，有機溶劑）

•蛋白酶和蛋白酶抑制劑

•螯合劑（會清除反應所需的鈣和鎂）

•對于顯色法：著色物質（在約405 nm處具有相當大吸收的物質）

•對于濁度法：濁度

（2）對內毒素的干擾

•金屬離子（例如鐵，鋁，鎵和鉻離子。即使微摩爾級別的存在也會對測試產生影響）

•表面活性劑

樣本的干擾效果可以通過進行藥典中的干擾因子測試來衡量：即通過對加標了已知量的內毒素的樣本進行檢測，獲得加標內毒素的回收率。如果回收率在50％至200％范圍內，則可以確定該樣本不會造成影響，換句話說，檢測所得的內毒素濃度是正確的。如果發現樣本會造成影響，可以通過對樣本溶液進行稀釋，從而減少對測試的影響。然而，對樣本溶液的稀釋會提高了由原始溶液（預稀釋溶液）的濃度轉換而得的內毒素濃度值。合理的稀釋倍數（最大有效稀釋倍數），是根據待檢測的內毒素的所需濃度以及所用LAL試劑的檢測靈敏度來確定的。欲了解反應干擾因子和最大有效稀釋度的詳細信息，詳見藥典中的細菌內毒素檢測。

細菌真菌檢測（SLP試劑）

一、檢測背景

肽聚糖不僅存在于革蘭氏陽性菌，也存在于革蘭氏陰性菌中。不管是陽性還是陰性的革蘭氏菌，SLP試劑對一般細菌均產生反應。此外，SLP試劑也會對真菌來源的β-葡聚糖起反應，因此SLP試劑可作用于細菌、真菌類的微生物。

SLP試劑雖然會對來源于各類細菌的肽聚糖和帶有β-1,3-糖苷鍵的β-葡聚糖產生強烈反應，但幾乎不與作為革蘭氏陰性菌細胞壁成分的脂多糖（內毒素）發生反應。能被LAL試劑（鱟試劑）檢測出的內毒素不會使SLP的級聯機制活化，而SLP試劑能檢測無法被鱟試劑檢測出的肽聚糖。因此聯合鱟試劑與SLP試劑一起使用，可對檢測材料中的微生物種類進行預測。

二、檢測產品

肽聚糖/β-葡聚糖高靈敏度檢測

SLP-HS Single Reagent Set II（以下簡稱SLP試劑，Silkworn Larvae Plasma，即家蠶幼蟲血漿），為由家蠶幼蟲血漿精制的凍干試劑。SLP試劑能夠與細菌/真菌中的肽聚糖/β-葡聚糖反應，可對包含細菌（革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌）、真菌在內的微生物進行高靈敏度檢測。

產品編號	產品名稱	產品規格
296-81001	SLP-HS Single Reagent Set II 高靈敏度 SLP 試劑盒Ⅱ（獨立包裝）	20 tests

內毒素檢測相關產品

產品編號	產品名稱	產品規格
ESB-0006	ES-Buffer 內毒素特異性緩沖液ES-Buffer	6 vialsx5.2mL
540-10081	Lysate Reagent Water,30 mL 內毒素檢測用水，30mL	30 mL×20
540-10081	Lysate Reagent Water,100 mL 內毒素檢測用水，100mL	100mL×12
293-51601	Endotoxin Extracting Solution for LAL Test 內毒素LAL試劑提取液	10mL×4
549-10291	ENDOTOXIN INDICATORS, >1000EU/vial 內毒素指示劑（>1000EU/瓶）	25 vials
293-16541	Control Standard Endotoxin 內毒素工作標準品	500 ng （500 ng/vial）

內毒素檢測用耗材

產品編號	產品名稱	產品規格	尺寸
293-35221	BioCleanPlate Wako 無內毒素96孔板Wako	50 pcs/pk	200 μL
294-35011	BioClean Tips Wako Extend S II 無內毒素移液槍槍頭Wako Extend SⅡ	100 tips（100μL）	200 μL
291-35021	BioCleanTip Wako 200Ⅱ 無內毒素移液槍槍頭Wako 200Ⅱ	100 tips（200μL）	1000 μL
298-35031	BioCleanTip Wako 1000Ⅱ 無內毒素移液槍槍頭Wako 1000Ⅱ	100 tips（1000μL）	96 well