異丙基硫代半乳糖苷, IPTG

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2014-07-02 09:44:00【大中小】

異丙基硫代半乳糖苷, IPTG, ISOPROPYL-β-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE, DIOXANE FREE

異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。

基礎(chǔ)信息

英文名	Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
別名	IPTG; Isopropyl-beta-D-thiogalactoside
產(chǎn)品名稱	異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷; 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖甙; 異丙基-beta-D-硫代半乳糖苷
分子結(jié)構(gòu)
分子式	C₉H₁₈O₅S
分子量	238.30
CAS 登錄號(hào)	367-93-1
EINECS 登錄號(hào)	206-703-0

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)。基于這個(gè)特性，當(dāng)pUC系列的載體DNA（或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。此外，它還可以作為具有l(wèi)ac或tac等啟動(dòng)子的表達(dá)載體的表達(dá)誘導(dǎo)物使用。

異丙基–β- D-半乳糖苷（IPTG）是一種有效的乳糖操縱子誘導(dǎo)試劑，不可逆結(jié)合乳糖阻遏物。乳糖操縱子是一種常用的遺傳物質(zhì)，用于檢測轉(zhuǎn)錄時(shí)的基因內(nèi)插。IPTG結(jié)合阻遏物特定位點(diǎn)，引起構(gòu)象變化，從而導(dǎo)致其自乳糖操縱子脫離。IPTG與生理誘導(dǎo)劑1,6-allolactose在結(jié)構(gòu)上相似，IPTG克服了β-異乳糖對β-半乳糖苷酶降解的敏感性。由于IPTG不被代謝，使其乳糖作為碳源的生理功能，與乳糖基因表達(dá)調(diào)控功能相分離。這些特性使得IPTG成為大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)表達(dá)化合物的理想選擇。

IPTG通常連接一個(gè)β-半乳糖苷酶底物,例如X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-半乳糖吡喃糖苷CAS：7240-90-6）或bluo-gal (5-溴-3-吲哚基-beta-D-半乳糖吡喃糖苷 CAS：97753-82-7）, 用于測定重組有機(jī)體的乳糖表型。

使用方法

首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

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