猴痘病毒檢測原料（涵蓋診斷酶、抗原、抗體），西寶生物助力猴痘檢測

來源：作者：人氣：-發表時間：2022-08-23 11:41:00【大中小】

什么是猴痘病毒？

猴痘是痘病毒科正痘病毒屬的一種。是一種罕見的病毒性人畜共患病（從動物傳播給人的病毒），其病原體猴痘病毒是一種DNA（脫氧核糖核酸）病毒，屬于痘病毒科正痘病毒屬，與在人類歷史上曾肆虐數千年的天花病毒是“近親”。猴痘病毒于1958年被初次發現，當時一組用于研究的猴子中出現“痘狀：傳染病，因此得名。自WHO1980年宣布人類徹底消滅天花以來，猴痘病毒已成為對公共衛生影響較大的正痘病毒。

猴痘病毒的主要傳播方式是通過直接接觸到受感染的動物的血液、體液、皮膚或黏膜傷口。人類之間的二次傳播主要由于密切接觸了感染者的呼吸道分泌物、皮膚損傷，或被患者體液或病變組織污染的物品（如患者皮疹破裂后流出的液體沾染的衣物、床單等）。猴痘病毒能在呼吸道飛沫中存在，但通常需要長時間面對面接觸才能傳播。

人感染猴痘的初期癥狀包括發燒、頭痛、肌肉酸痛、背痛、淋巴結腫大等，之后可發展為面部和身體大范圍皮疹。多數感染者會在幾周內康復，但也有感染者會出現嚴重疾病。

據世界衛生組織介紹，猴痘病毒感染癥狀與天花相似，但臨床嚴重程度較輕，潛伏期通常為6至13天，可能長達21天。

由于多種痘病毒具有“交叉免疫”特點，人接種天花疫苗對防治猴痘也有效。據世界衛生組織數據顯示，天花疫苗對猴痘的有效率可達85%。常見的家用消毒劑可以殺死猴痘病毒。

猴痘病毒的的檢測方法

1. 核酸檢測：采用核酸擴增檢測方法在皮疹、皰液、痂皮、口咽或鼻咽分泌物等標本中可檢測出猴痘病毒核酸。

2. 抗原/抗體檢測：免疫檢測方法既可用于抗原，也可用于抗體檢測。但猴痘病毒與痘病毒之間存在抗原交叉，特異性不夠，因此不能準確鑒別猴痘病毒，常用于流行病學調查。

3. 病毒培養：采集上述標本進行病毒培養可分離到猴痘病毒。病毒培養應當在三級及以上生物安全實驗室開展。

為應對猴痘疫情，國內外眾多IVD企業積極響應，推進猴痘病毒相關檢測產品的研發和上市。西寶生物作為深耕于生命科學領域的一家上游成熟供應商，擁有成熟的細胞表達平臺、穩定細胞系篩選平臺、大分子純化平臺、蛋白結構分析平臺，西寶長期為IVD企業提供品質優良、高性價比的原料。歡迎垂詢400-021-8158！

一、熒光定量PCR原理

熒光定量PCR較早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。

qPCR可分為熒光染料法（SYBR Green Ⅰ法為代表）和熒光探針法（TaqMan法為代表）。

熒光探針法（Taqman 技術）：TaqMan探針法qPCR是使用TaqMan熒光探針進行熒光檢測的方法。其基礎原理是PCR擴增時，加入一對引物的同時再加入一個特異性的熒光探針。.該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標記一個熒光報告基團和一個熒光淬滅基團，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收，PCR 儀檢測不到熒光信號； PCR擴增時（在延伸階段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條 DNA 鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與 PCR 產物形成同步，這也是定量的基礎所在。

TaqMan水解探針作用機理圖

TaqMan探針法qPCR優點

特異性高、定量準確 - 熒光探針只與目的序列結合，理論上探針法的熒光信號只來源于目的序列，即不受非特異性產物的影響，因此，TaqMan探針法qPCR的特異性高，定量準確。

實驗耗時短 - 探針法qPCR的高特異性，無需再設置熔解曲線檢測擴增產物的特異性如何，大大縮短了實驗時間。

多重反應可兼容，適用性強 - 不同波長的熒光報告基團可以標記不同的探針，因此可以在同一個反應體系中利用不同熒光標記的探針同時檢測多個靶標，達到節省實驗成本的目的。

Taqman探針法熒光PCR相關試劑原料

樣本提取與純化

產品描述	產品名稱	貨號	備注
核酸釋放劑	核酸釋放劑 Nucleic Acid Release Reagent	DAA1404A
核酸釋放劑常用組分	三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(TRIS-HCl)	ACC0029A	緩沖鹽
	Guanidine Thiocyanate 異硫氰酸胍	ACH0012A	蛋白質變性劑
	Guanidine hydrochloride 鹽酸胍	ACH0011A	核酸酶強抑制劑
	Proteinase K 蛋白酶K	EBY0027M	高比活性
	Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸鈉（SDS）	ACH0017A	陰離子去垢劑
	Urea 尿素	ACH0029E
	乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA-2Na)	ACH0010A	重要的螯合劑

探針法qPCR檢測預混液

產品描述	產品名稱	貨號	備注
超高靈敏度	Seebio® TaqMan multiplex qPCR master mix(探針法）	DAA1400A	單重/多重，預混液，實驗方便
全預混穩定性加強版（含UDG Mg2+和dNTP）	Seebio® Enhan TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) (2XMix預混合試劑包含反應緩沖液和酶mix，已包含Mg2+和dNTP)	DAA1401A	單酶+buffer + dNTPs and Mg2+可以根據實驗，優化酶，dNTP，Mg2+的投入量

單酶

產品描述	產品名稱	貨號	備注
熱啟動Taq酶	Seebio® HotStart Direct Taq DNA Polymerase	DAA1402A	-
Bst酶	Bst Ⅱ plus DNA Polymerase	DAA0792A	-
熱敏UDG酶	Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile	DAA0230A	-

西寶生物可提供各種分子診斷酶產品，均可定制大包裝，詳情咨詢西寶生物400-021-8158！或者聯系我司診斷團隊。

二、猴痘病毒免疫檢測

猴痘病毒免疫檢測方法主要包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測IgG、IgM抗體和免疫組化檢測病毒抗原。以及用MPXV抗體進行免疫化學分析,可區分痘病毒感染和皰疹病毒。

已經證實,抗病毒抗體和T細胞反應在疾病發作前后增加,在皮疹發生后5天左右和8天以上的血清中分別檢測到猴痘病毒IgM和IgG。如果有皮疹和嚴重疾病史的未接種疫苗的個體血清中存在IgM和IgG抗體,則診斷可能存在MPXV感染。IgM捕獲ELISA陽性表明近期接觸過MPXV,而IgG捕獲ELISA陽性表明該個體以前通過接種疫苗或自然感染接觸過MPXV。在一個樣本中同時存在IgM和IgG,表明在以前接種過疫苗或接觸過自然感染MPXV的個體。然而,正痘病毒具有血清學交叉反應性,抗原和抗體檢測方法不能提供猴痘特異性確認,但對于MPXV流行地區的血清學檢測也許是可行的方法。

猴痘抗原檢測對人體血清、血漿、全血、咽拭子、唾液或病灶滲出物等標本進行測試，以確定是否存在猴痘病毒抗原。猴痘病毒IgM/IgG抗體檢測使用幾滴血液來尋找人體在感染猴痘后產生的抗體。

西寶生物已成功開發出多款猴痘病毒相關蛋白產品（原核表達/真核表達）。重組蛋白根據已發布的猴痘病毒基因序列進行設計,通過化學合成的方法獲取MonkeypoxVirus基因序列,利用E.coli表達系統進行重組蛋白表達/純化等獲得。可用于抗原檢測的陽性對照產品。

西寶研發團隊還根據已開發的猴痘蛋白產品，作為為免疫原，借助快速單抗發現技術，篩選出近百株猴痘抗體，涉及A35R、B6R、A29L、M1R 4個關鍵表位，并成功配對高親和力A35R抗體和A29L抗體。

猴痘抗原抗體產品清單：

猴痘病毒（Monkeypox virus）MPXV抗原可用于病毒疫苗、診斷試劑開發及基礎研究的工具試劑
貨號	EDD0683B	EDD0689B	EDD0690B	EDD0691B
基因名	A29L	A35R	B6R	M1R
靶點介紹	A29L是細胞內成熟病毒（IMV）表面包膜蛋白（與牛痘病毒VACV,A27同源）。細胞內成熟病毒（IMV）表面包膜蛋白，介導病毒對宿主細胞的識別作用。	A35R與牛痘病毒的A33R高度相似，是一種細胞外包膜病毒（EEV）特異性II型膜糖蛋白，在有效的EEV形成中起著關鍵作用，并有助于病毒顆粒的有效細胞間傳播，是開發猴痘病毒治療性抗體的潛在靶點。	B6R是宿主范圍蛋白，位于細胞外包膜病毒粒子（EEV）的膜上，與牛痘病毒補體控制蛋白B5同源，參與補體激活的負調節。研究表明B5依賴于與A33或A34的相互作用，以定位到細胞內包膜的位點，并能相互結合釋放到細胞外病毒體的包膜中。B5對于有效生產感染性EV很重要，A33，A34，B5三者復合物在ER退出以及三種糖蛋白正確定位到包裹的細胞內部位中起作用。	M1R與牛痘病毒L1蛋白同源，是一種在成熟IMV顆粒表面發現的跨膜蛋白。由L1R ORF編碼，高度保守，參與病毒粒子組裝，在病毒進入和成熟過程中發揮重要作用。L1是誘導低pH觸發的細胞-細胞融合所必需的，且對牛痘病毒復制很重要。
純度	大于 90% ， SDS-PAGE
緩沖液	1x PBS，pH 7.4
儲存	-80℃分裝保存，避免反復凍融
用途	用于猴痘病毒感染后的IgG/IgM以及總抗體檢測

猴痘病毒（Monkeypox virus）MPXV抗體可用于病毒疫苗、診斷試劑開發及基礎研究的工具試劑
貨號	EKY0470A / EKY0470B	EKY0471A / EKY0471B	EKY0472A / EKY0472B
免疫原	猴痘病毒A29L蛋白重組抗體（MPXV-A29L-Antibody）	猴痘病毒A35R蛋白重組抗體（MPXV-A35R-Antibody）	猴痘病毒B6R蛋白重組抗體（MPXV-A35R-Antibody）
應用	ELISA、免疫層析
純度	大于 90% ， SDS-PAGE
緩沖液	1x PBS，pH 7.4
儲存	-80℃分裝保存，避免反復凍融