西寶生物隆重推出CRO生物技術服務和優惠促銷及發表論文獎勵三大活動（詳情點擊）

服務內容

步驟1. 目標基因全基因合成：

1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果西寶生物的cDNA文庫中有這個基因，我們免費提供給客戶。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化，密碼子優化。
3. 合成設計好的基因序列。

提供給客戶：目標基因（在T載體或常規穿梭載體上）及測序報告。 
價格：2.2元/堿基,如果客戶直接提供構建好的質粒，則免去這部分費用． 
時間：2~3周，根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務

步驟2. 目標基因亞克隆：

1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 西寶生物免費提供如下表達載體：

提供給客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。 
價格：免費　 
時間：1-2周 

步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選：

1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供給客戶：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。 
價格：免費 
時間：1周 

步驟4. 目標蛋白表達及純化：

1. 搖瓶培養1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

提供給客戶：純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。 
價格：
1. 如果目標蛋白含有親和標簽（His-tag or GST-tag） 
5,000元（目標蛋白純度>80%，不切除標簽） 
5,500元（目標蛋白純度>90%，不切除標簽） 
6,000元（目標蛋白純度>80%，切除標簽） 
6,500元（目標蛋白純度>90%，切除標簽） 
2. 如果目標蛋白不含有親和標簽 
8,000元（目標蛋白純度>80%） 
9,000元（目標蛋白純度>90%） 
3. 如果沒有獲得目標蛋白，則不收取任何費用(僅限客戶直接提供構建好的質粒時)。 

時間：2~3周 
備注：
1. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同，我們最終根據實際情況將給客戶提供最少1mg，最多10mg的目標蛋白，所收取的費用是相同的。 
2. 我們提供的最終產品一般為保存于常規的緩沖液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液）中蛋白質溶液，并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。 
3. 每次Western blot檢測最多7個樣品，因為要加入陽性對照，陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測，如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗，如果客戶需要使用其他一抗，則需要客戶提供。詳見 Western Blot檢測服務。

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