化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物-堿性磷酸酶（ALP）性能穩(wěn)定活性高，替代進口優(yōu)選

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-11-13 08:59:00【大中小】

背景介紹

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結(jié)合糖蛋白，分子量約140KDa。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點中包括兩個鋅離子和一個鎂離子，這三個位點的金屬離子對于酶活性至關(guān)重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機磷酸鹽。1,2-二氧雜環(huán)丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團水解，形成一個不穩(wěn)定的中間體，自行分解后四元環(huán)斷裂釋放出大量能量，從而激發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。因此磁珠-抗體偶聯(lián)物與堿性磷酸酶-抗體偶聯(lián)物在化學(xué)發(fā)光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標(biāo)試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩(wěn)定性和高敏感性的優(yōu)勢。AP在生物學(xué)尤其是分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

隨著酶促化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)的發(fā)展，酶偶聯(lián)抗體及其偶聯(lián)方法受到廣泛關(guān)注。目前常用的堿性磷酸酶偶聯(lián)方法有過碘酸鈉氧化法、碳二亞胺法和SMCC異性雙功能偶聯(lián)法等。過碘酸鈉氧化法是先將酶進行醛基化，然后和抗體偶聯(lián)，這種操作比較復(fù)雜，偶聯(lián)產(chǎn)物有效活性濃度低。碳二亞胺法利用碳二亞胺類物質(zhì)對蛋白質(zhì)進行羧基化，這種方法容易形成蛋白分子間的自身聚合，產(chǎn)生非均一性產(chǎn)物。SMCC異性雙功能偶聯(lián)法利用SMCC的異性官能團，分別連接堿性磷酸酶和抗體，這種方法相比過碘酸鈉法和碳二亞胺法偶聯(lián)效率高。

西寶生物提供高質(zhì)量的AP原料，性能穩(wěn)定、活性高，精準(zhǔn)助力免疫診斷試劑產(chǎn)品的開發(fā)，受到國內(nèi)外廣大客戶朋友的肯定與支持。

表1 AP酶參數(shù)

參數(shù)	羅氏AP酶對照	西寶DCE0108K酶
保存條件	2-8℃	2-8℃
規(guī)格	20±1mg/mL	20±1mg/mL
比活性	＞7000U/mg	＞7000U/mg
穩(wěn)定性	45℃	45℃
糖基化	≤7%	≤7%
來源	重組	重組
純度	＞95%	＞95%

性能對比

2.1 直接測試酶活

2.1.1實驗步驟

a）分別選擇一批次羅氏AP酶及西寶DCE0108K酶，根據(jù)其標(biāo)識濃度分別配制成表2的6個濃度；
b）將配制好的酶結(jié)合物每孔10uL加入包被的發(fā)光板中，每個濃度3次重復(fù)；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發(fā)光底物，在酶標(biāo)儀上測試發(fā)光值。

2.1.2 實驗結(jié)果

當(dāng)AP濃度介于濃度1-濃度6時，兩者的發(fā)光值均值偏差在±20%范圍內(nèi)，表明西寶AP-01酶與羅氏AP酶測試性能相當(dāng)。

表2 AP酶活比對（直接測試）

AP酶濃度	羅氏酶發(fā)光值均值	西寶DCE0108K酶發(fā)光值均值	西寶與羅氏偏差
濃度6	1572599	1605305	2.1%
濃度5	1311183	1530485	16.7%
濃度4	131399	147823	12.5%
濃度3	10433	10318	-1.1%
濃度2	1096	1040	-5.1%
濃度1	613	841	37.1%
0	333		/

2.2 標(biāo)記抗體測試酶活（SMCC偶聯(lián)法）

2.2.1實驗步驟

a) 抗體1包被；
b) 羅氏酶及西寶DCE0108K酶分別標(biāo)記抗體2（SMCC偶聯(lián)法）；
c）配置7個濃度校準(zhǔn)品；
d）加樣，每個濃度3次重復(fù)，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發(fā)光底物，在酶標(biāo)儀上測試發(fā)光值。

2.2.2 實驗結(jié)果

表3 AP酶活比對（標(biāo)記測試）

校準(zhǔn)品	羅氏酶發(fā)光值均值	西寶AP-01發(fā)光值均值	西寶與羅氏酶偏差
校準(zhǔn)品7	1187535	1402472	18.1%
校準(zhǔn)品6	1034131	1197433	15.8%
校準(zhǔn)品5	743609	892830	20.1%
校準(zhǔn)品4	138820	186484	34.3%
校準(zhǔn)品3	17832	22757	27.6%
校準(zhǔn)品2	2740	3663	33.7%
校準(zhǔn)品1	606	823	35.8%
0	450		/

當(dāng)AP濃度介于校準(zhǔn)品1-校準(zhǔn)品7時，西寶DCE0108K酶測試發(fā)光值均高于羅氏AP酶發(fā)光值。這表明，在標(biāo)記抗體時，西寶DCE0108K酶性能優(yōu)于R酶。

西寶生物堿性磷酸酶的靈敏度、重復(fù)性以及穩(wěn)定性性能優(yōu)越可完美替代進口產(chǎn)品，為體外診斷IVD研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)降本賦能。

產(chǎn)品訂購信息：

產(chǎn)品名稱	貨號	推薦應(yīng)用
堿性磷酸酶ALP	DCE0108K	診斷標(biāo)記用酶
Alkaline Phosphatase, EIA Grade	10556602103	Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥3,000 U/mg
Alkaline Phosphatase, recombinant, highly active	03137031103	Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥7,000 U/mg