去除融合蛋白標簽的蛋白酶——看這里

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-11-09 08:58:00【大中小】

大家好，我是蛋白工具酶家族的新成員，我的名字叫“重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做個自我介紹：

產品描述

重組TEV蛋白酶（rTEV Protease）經過基因工程改造，在大腸桿菌中重組表達，帶His標簽(6X His tag)，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內表現出更強的穩定性和特異性。rTEVProtease是一種用來切除融合蛋白上標簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點專一性更強，具有高活性和高特異性的特點，。

品牌	貨號	包裝規格	比活
Seebio®	EBY3644A-1KU	酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml	1U/μL
Seebio®	EBY3644A-5KU	酶：1×5KU、Buffer：2×1.5ml	5U/μL
Seebio®	EBY3644A-10KU	酶：2×5KU、Buffer：4×1.5ml	5U/μL

產品特點

嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。其序列專一性遠比凝血酶、因子xa、腸激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在廣泛pH（6.0-8.5）和溫度（4-30℃）內進行酶切，使得反應條件的選擇可根據目的蛋白的情況而靈活變動。rTEV酶在pH 7.0，30℃時可達到最佳活性。

產品應用

用于切除重組蛋白的融合標簽。rTEV酶的N端含有6×His，酶切結束后可以通過Ni2+親和層方便地去除rTEV，以達到純化目的蛋白的目的。

產品屬性

來源（Source）	大腸桿菌重組表達
外觀（Appearance）	無色透明液體
分子量	27.8kDa
比活力（Specific Activity）	1U/μL 5U/μL
活性定義（Unit Definition）	在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。
純化（Purification）	色譜純化
純度（Purity）	≥95%（by SDS-PAGE）
產品組成	25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。

表1. 不同溫度下rTEV酶切活性

反應時間（h）	不同溫度下剪切活性（%）
反應時間（h）	4℃	16℃	21℃	30℃
1	34	58	56	70
2	58	80	78	90
3	71	99	99	99
3.5	84	99	99	99

應用舉例

組分	用量
融合蛋白	30μg
rTEV Protease (1 U/μL)	10μL
rTEV buffer（10×）	10μL
ddH2O	隨終體積變動

1.按如上表格配制反應體系。
2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨的EP管中。
3.向上述EP管中加入適量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切樣品進行SDS-PAGE電泳分析，確定酶切效果，調整所需的合適酶量和反應時間。
5.如果目的蛋白在30℃不穩定，可以于4℃反應過夜(16小時左右)。

運輸與保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期≥2年。

影響天然TEV酶活性的常見因素：

1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響；

2）Zn2+濃度（>5 mM）對rTEV活性有抑制作用；

3）與半胱氨酸反應的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。

常見問題

Q：該產品有何優點？
A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時不會出現天然TEV酶的自我酶解問題，在廣譜的溫度范圍內表現出更強的穩定性和特異性。

Q：該產品可用于什么實驗？、
A：rTEV 是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性。

Q：該產品的最適酶切時間和溫度是多少？
A：16-30℃下反應 3-3.5h 最好。

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