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重組蛋白純化檢測(cè)用 PA標(biāo)簽系統(tǒng)

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2025-04-08 10:10:00【大中小】

重組蛋白純化檢測(cè)用

PA標(biāo)簽系統(tǒng)

◆特點(diǎn)

●　通過樹脂再生，降低運(yùn)行成本

●　超高親和性抗體，實(shí)現(xiàn)高回收率、高純度純化

●　在動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系（HEK293T細(xì)胞、CHO細(xì)胞等）中，有效純化蛋白

●　PA標(biāo)簽系統(tǒng)是使用可識(shí)別肽標(biāo)簽（12個(gè)氨基酸殘基）的單抗（NZ-1）。日本開發(fā)的親和性純化標(biāo)簽系統(tǒng)。

●　NZ-1單抗對(duì)PA tag具有高親和性和特異性，可應(yīng)用于Western Blotting、細(xì)胞流式分析、免疫組化（ICC）。

通過免疫沉淀，可純化PA標(biāo)簽融合蛋白以及樹脂再生。

●　PA標(biāo)簽系統(tǒng)，可一步純化高純度PA標(biāo)簽融合蛋白。

◆PA標(biāo)簽系統(tǒng)

Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).

Fujii, Y. et al.

新型親和標(biāo)簽系統(tǒng)“PA tag”的應(yīng)用方法~蛋白的純化及檢測(cè)~

蛋白科學(xué)學(xué)會(huì)檔案, 7, e075 (2014)

◆PA標(biāo)簽表達(dá)載體案例

載體	表達(dá)模式	宿主細(xì)胞	MCS啟動(dòng)子
pCAG	瞬時(shí)表達(dá)	靈長類（人、猴）、犬細(xì)胞等粘著細(xì)胞和嚙齒動(dòng)物細(xì)胞	CAG

測(cè)序用引物序列、其他載體序列的相關(guān)詳細(xì)信息，已附在產(chǎn)品現(xiàn)貨說明書中。

另外可點(diǎn)擊和光主頁/TARGET標(biāo)簽，查看序列信息、Multi Cloning Site(MCS)信息。

◆用PA標(biāo)簽從培養(yǎng)上清中親和提純的案例

數(shù)據(jù)提供：大阪大學(xué) 蛋白研究所附屬蛋白分析先進(jìn)研究中心

分子創(chuàng)制學(xué)研究室高木淳一老師，藤井勇樹老師

◆Protocol目的蛋白的純化

１．哺乳類動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染(HEK293T)

轉(zhuǎn)染處于40-60%融合狀態(tài)的細(xì)胞

培養(yǎng)基：D-MEM, 5%FBS

２．回收培養(yǎng)上清和吸附蛋白樹脂

轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后，回收約420 mL培養(yǎng)上清，加入8 mL抗PA標(biāo)簽抗體瓊脂糖珠，混合2小時(shí)（2-10℃）

３．樹脂回收

用50 mL的純化柱。回收步驟2)中的瓊脂糖珠

４．樹脂洗滌

加入珠4倍量的TBS 緩沖液（20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl），清洗5次

５．PA標(biāo)簽肽從樹脂中競(jìng)爭(zhēng)性洗脫

加入經(jīng)1×TBS溶液, pH 7.5溶解過的PA 標(biāo)簽肽（終濃度0.1 mg/mL），體積量需為珠的一倍，

然后分10次回收PA標(biāo)簽融合蛋白X

６．SDS-PAGE

樣品量

c. sup：5 μL, flow through：5 μL, wash：5 μL,

肽洗脫（1-10）：各10 μL

可純化PA標(biāo)簽融合蛋白X且不依賴PA標(biāo)簽。→可實(shí)現(xiàn)極高純度的親和純化。

◆通過PA tag降低背景的方法

可在含有高濃度NaCl的TBS溶液中，通過前清洗去除雜質(zhì)蛋白??！

M: Marker
I: input 100ng分
P: 純化前樣品
1: wash片段①
2: wash片段②
3: wash片段③
4: wash片段④
5: wash片段⑤
6: wash片段⑥
7: wash片段⑦
8: wash片段⑧
9: wash片段⑨
10: 酸洗脫①
11: 酸洗脫②
12: 酸洗脫③
13: 酸洗脫④
14: 酸洗脫⑤

在20 mL的昆蟲細(xì)胞溶解液中加入蛋白Z，使其濃度變?yōu)?.0 mg/L后，添加200 μL抗PA標(biāo)簽抗體瓊脂糖珠，4℃溫度條件下，攪拌3小時(shí)。

分別用不同濃度的TBS溶液（0.15 M、0.5 M、1.0 M NaCl）進(jìn)行調(diào)整，用瓊脂糖珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl(pH 2.7)，室溫條件下平穩(wěn)震動(dòng)5 min。

離心后回收上清，用1 M Tris-HCl (pH 9.0)做中和處理。

SDS-PAGE后進(jìn)行銀染，比較去除污染蛋白之后，不同濃度下的結(jié)果。

◆使用案例：Western Blotting

數(shù)據(jù)提供：東北大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)系研究科

地域革新領(lǐng)域加藤幸成老師，金子美華老師

NZ-1顯示出與天然抗體具有相同的高檢測(cè)靈敏度。

Lane 1

一抗：抗IDH1抗體（RcMab-1）, 1 μg/mL

二抗：抗大鼠IgG-HRP標(biāo)簽, 1000倍稀釋

Lane 2

一抗：抗PA tag抗體, 1 μg/mL

二抗：抗大鼠IgG-HRP標(biāo)簽, 1000倍稀釋

Lane 3

一抗：抗DYKDDDDK標(biāo)簽抗體, 3.5 μg/mL

二次抗體：抗小鼠IgG-HRP標(biāo)簽, 1000倍稀釋

樣品量：各10 μg
曝光時(shí)間：10分鐘

◆PA標(biāo)簽系列

產(chǎn)品名稱	子類克隆號(hào)	適用實(shí)驗(yàn)	規(guī)格	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
單抗
抗PA標(biāo)簽, 大鼠單抗 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody	大鼠IgG_2a NZ-1	IP, WB, FCM, ICC	免疫化學(xué)用	016-25861	200 μL
				012-25863	1 mL
HRP標(biāo)簽單抗
抗PA標(biāo)簽, 大鼠單抗,過氧化酶結(jié)合 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	大鼠IgG_2a NZ-1	WB	免疫化學(xué)用	015-25951	200 μL
				011-25953	1 mL

產(chǎn)品名稱	子類克隆號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
抗體結(jié)合瓊脂糖珠
抗PA標(biāo)簽抗體瓊脂糖珠 Anti PA tag Antibody Beads	大鼠IgG_2a NZ-1	免疫化學(xué)用	012-25841	2 mL(Net 1 mL)
			018-25843	10 mL (Net 5 mL)
			016-25844	50 mL (Net 25 mL)
識(shí)別N端、C端的PA標(biāo)簽使用載體：4% 瓊脂糖溶液組成：1 x PBS (pH7.2), 0.05 w/v%疊氮化鈉抗體結(jié)合量：參見標(biāo)簽記載結(jié)合容量：1 mL本品可結(jié)合約0.015-1.0 mg的PA標(biāo)簽融合蛋白
抗體結(jié)合磁珠
MagCaptureTM HP 抗PA標(biāo)簽抗體磁珠 MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads	大鼠IgG_2a NZ-1	免疫化學(xué)用	137-18751	2 mL
溶液組成：1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05 w/v% sodium azide

產(chǎn)品名稱	備注	規(guī)格	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
肽
PA標(biāo)簽肽 PA tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	167-25501	5 mg
PA標(biāo)簽肽 PA tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	163-25503	25 mg
清洗溶液
PA標(biāo)簽清洗溶液 PA tag Washing Solution	已過濾消毒即用型	基因研究用	169-27261	50 mL

產(chǎn)品名稱	可選Marker		產(chǎn)品編號(hào)	包裝
產(chǎn)品名稱	大腸桿菌	動(dòng)物細(xì)胞	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
瞬時(shí)載體
pCAG-Ble PA 標(biāo)簽-C pCAG-Ble PA tag-C	Bleomycin		161-26861	20 μg
pCAG-Ble PA 標(biāo)簽-N 信號(hào) 增加型 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus	Bleomycin		168-26871	20 μg
pCAG-Bsd PA 標(biāo)簽-C pCAG-Bsd PA tag-C	Blasticidin S		165-26881	20 μg
pCAG-Bsd PA 標(biāo)簽-N 信號(hào) 增加型 pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus	Blasticidin S		162-26891	20 μg
pCAG-Neo PA 標(biāo)簽-C pCAG-Hyg PA tag-C	Hygromycin B		165-26901	20 μg
pCAG-Hyg PA 標(biāo)簽-N 信號(hào) 增加型 pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus	Hygromycin B		162-26911	20 μg
pCAG-Neo PA 標(biāo)簽-C pCAG-Neo PA tag-C	Kanamycin	G418	169-26921	20 μg
pCAG-Neo PA 標(biāo)簽-N 信號(hào) 增加型 pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus	Kanamycin	G418	166-26931	20 μg

◆相關(guān)產(chǎn)品

內(nèi)參照

下表為Western Blot實(shí)驗(yàn)中參照用單抗一覽表。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
抗β肌動(dòng)蛋白單抗 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody	免疫化學(xué)用	013-24553	200 μg
		011-24554	1 mg
		017-24556	5 mg
抗β肌動(dòng)蛋白單抗,過氧化物酶標(biāo)記 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	免疫化學(xué)用	017-24573	200 μL
抗α-微管蛋白, 單抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody	免疫化學(xué)用	011-25034	10 μg
		017-25031	200 μg
		013-25033	1 mg
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody 抗β-微管蛋白, 單抗	免疫化學(xué)用	018-25044	10 μg
		014-25041	200 μg
		010-25043	1 mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody 抗GAPDH, 單抗	免疫化學(xué)用	016-25523	200 μg
		014-25524	1 mg
		010-25526	5 mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated 抗GAPDH, 單抗, 過氧化酶結(jié)合	免疫化學(xué)用	015-25473	200 μL

蛋白酶抑制劑系列

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	產(chǎn)品編號(hào)	包裝
蛋白酶抑制劑混合物試劑盒 I，無動(dòng)物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized	通用型	165-26021	1 mL用
	通用型	161-26023	1 mL用×5
蛋白酶抑制劑混合物試劑盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution (EDTA free) (×100)	動(dòng)物細(xì)胞	163-26061	1 mL
	動(dòng)物細(xì)胞	169-26063	1 mL×5
蛋白酶抑制劑混合物試劑盒V （無EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized	2D電泳	162-26031	1 mL
	2D電泳	168-26033	1 mL×5
蛋白酶抑制劑混合物試劑盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)	植物細(xì)胞	164-26091	1 mL
	植物細(xì)胞	160-26093	1 mL×5
蛋白酶抑制劑混合物試劑盒VII，DMSO溶液，組氨酸標(biāo)簽蛋白（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (×100)	His Tag 純化^※	167-26101	1 mL
	His Tag 純化^※	163-26103	1 mL×5