Seebio(R) 高活性重組堿性磷酸酶（ALP）

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-09-03 13:41:00【大中小】

背景介紹

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結合糖蛋白。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點中包括兩個鋅離子和一個鎂離子，這三個位點的金屬離子對于酶活性至關重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機磷酸鹽。1,2-二氧雜環丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團水解，形成一個不穩定的中間體，自行分解后四元環斷裂釋放出大量能量，從而激發化學發光反應。因此磁珠-抗體偶聯物與堿性磷酸酶-抗體偶聯物在化學發光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩定性和高敏感性的優勢。AP在生物學尤其是分子生物學和免疫學領域有著廣泛的應用。

隨著酶促化學發光檢測技術的發展，酶偶聯抗體及其偶聯方法受到廣泛關注。目前常用的堿性磷酸酶偶聯方法有SMCC異性雙功能偶聯法、過碘酸鈉氧化法、碳二亞胺法和等。過碘酸鈉氧化法是先將酶進行醛基化，然后和抗體偶聯，這種操作比較復雜，偶聯產物有效活性濃度低。碳二亞胺法利用碳二亞胺類物質對蛋白質進行羧基化，這種方法容易形成蛋白分子間的自身聚合，產生非均一性產物。SMCC異性雙功能偶聯法利用SMCC的異性官能團，分別連接堿性磷酸酶和抗體，這種方法相比過碘酸鈉法和碳二亞胺法偶聯效率高。

《BIOCONJUGATE TECHNIQUES》中介紹了部分SMCC法標記酶的原理：

a）SMCC與酶分子上的胺基反應產生馬來酰亞胺活化衍生物，能夠與含巰基的抗體分子偶聯（如圖一所示）；

b）抗體可以在其胺基上用2-亞氨基硫烷修飾，以形成與SMCC活化酶結合的巰基。衍生化酶上的馬來酰亞胺基團與抗體上的硫醇反應形成硫醚鍵（如圖二所示）。

圖1 SMCC活化酶

圖2 抗體活化及連接酶

西寶生物創新研發團隊依托現有技術平臺自主研發生產的ALP堿性磷酸酶產品，性能穩定、活性高，可替代進口品牌，且經眾多客戶的反復測評得到了大家的一致認可。此酶在化學發光平臺經過多個臨床項目驗證，信噪比、精密度、穩定性等與進口品牌性能持平。歡迎索樣測試，服務熱線：400-021-8158

Seebio® 重組堿性磷酸酶產品詳情

產品編號	DCE0108L
產品名稱	Alkaline Phosphatase recombinant（Highly Active） Seebio® 重組堿性磷酸酶（高活性）
EC 號	3.1.3.1
Cas號	9001-78-9
來源	Bovine intestinal mucosa 小牛腸粘膜
比活	≥7000U/mg
純度	≥96%（HPLC）
表達	CHO-K1
分子量	≈62kDa
糖基化	18±5%
外觀	澄清液體
規格	5mg，10mg，50mg,100mg
濃度	14-21mg/ml（具體參考隨貨COA）
儲存緩沖液	3MNaCl，5mMMgCl2，0.2mMZnCl2，30mMTEA，PH7.6
酶活定義	在37℃、pH 9.5條件下，一個單位的堿性磷酸酶每分鐘能夠水解對硝基苯酚磷酸鹽（pNPP）產生1µmol對硝基苯酚（pNP）。
儲存運輸	Store at 2°C to 8°C. DO NOT FREEZE.

產品用途（ALP）：

Ø 在免疫系統中重組堿性磷酸酶ALP偶聯到蛋白上(抗體、鏈霉親和素等) ,識別目標分子（底物）;

Ø 在分子生物學系統中ALP用在DNA或RNA的5'-末端去磷酸以防止自連;

Ø 經ALP去磷酸化作用后, DNA或RNA還可被放射性標記磷酸鹽標記(通過T4多核苷酸激酶) ;

Ø ALP還常用來蛋白的去磷酸化實驗，比如酪蛋白和核酸等；

Seebio® 堿性磷酸酶產品優勢：

u 性價比高，可直接平替進口品牌

u 包裝規格靈活適合研發到生產

u 精密度、信噪比良好

u 比活性高，性能優異

Seebio® 堿性磷酸酶與進口R品牌-2103 ALP酶性能對比（實測案例）

1.1 ALP標記IL-6項目（SMCC法）

分別采用進口R品牌-2103 ALP酶及西寶自產三個批次ALP酶（貨號：DCE0108L）標記人白介素6（IL-6）抗體（貨號：EKY0129D），搭配磁珠（貨號：DEG0814A）包被人白介素6（IL-6）抗體1（貨號：EKY0129Z）測試40例臨床樣本（羅氏IL-6電化學發光試劑盒賦值）及測試精密度。

由表1數據可知，進口R品牌-2103 ALP酶標記IL-6抗體及西寶三個批次ALP酶標記IL-6抗體測試臨床相關性r分別為0.996、0.998、0.997、0.997，表明西寶三個批次ALP酶標記IL-6抗體測試臨床相關性良好；此外，西寶三個批次ALP酶分別與進口R品牌-2103 ALP酶測試IL-6樣本的平均偏差分別為4.9%、3.7%、6.8%，表明西寶三個批次ALP酶與進口R品牌-2103 ALP酶差異很小。

由表2數據可知，進口R品牌-2103 ALP酶標記IL-6抗體及西寶三個批次ALP酶標記IL-6抗體測試IL-6樣本精密度分別為1.6%、1.1%、2.4%、2.0%，表明西寶三個批次ALP酶標記IL-6抗體測試臨床樣本精密度良好。

表1 進口R品牌-2103 ALP酶與西寶ALP測試IL-6臨床樣本數據

序號	臨床樣本結果 pg/mL	進口R品牌-2103 ALP酶發光值	西寶ALP酶批次1 發光值	西寶ALP酶批次1與進口R品牌 ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次2 發光值	西寶ALP酶批次2與進口R品牌 ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次3 發光值	西寶ALP酶批次3與進口R品牌ALP酶發光值偏差
1	3.5	16454	16292	-1.0%	15757	-4.2%	15807	-3.9%
2	8	78293	78589	0.4%	79500	1.5%	79781	1.9%
3	9.9	54224	53352	-1.6%	52407	-3.4%	52404	-3.4%
4	22	86209	87244	1.2%	83819	-2.8%	86418	0.2%
5	37.5	147872	149135	0.9%	149388	1.0%	149391	1.0%
6	93.1	560502	580377	3.5%	577876	3.1%	586633	4.7%
7	124	716900	745133	3.9%	738282	3.0%	777282	8.4%
8	172	998616	1054358	5.6%	1055302	5.7%	1064425	6.6%
9	265	1386708	1428782	3.0%	1455081	4.9%	1490701	7.5%
10	335	1614700	1737159	7.6%	1760949	9.1%	1816254	12.5%
11	420	2361064	2408001	2.0%	2397694	1.6%	2423464	2.6%
12	480	2443803	2769192	13.3%	2779887	13.8%	2955628	20.9%
13	501	3125606	3118765	-0.2%	3122118	-0.1%	3144256	0.6%
14	628	3855067	3913636	1.5%	3907211	1.4%	4020092	4.3%
15	696	4017892	4122175	2.6%	4096585	2.0%	4280100	6.5%
16	701	4083067	4247255	4.0%	4344028	6.4%	4400938	7.8%
17	726	4225532	4469107	5.8%	4495679	6.4%	4595290	8.8%
18	730	4508639	4736976	5.1%	4797685	6.4%	4869524	8.0%
19	770	4706747	4838610	2.8%	4803327	2.1%	4860497	3.3%
20	796	3898043	3892002	-0.2%	4009443	2.9%	4016326	3.0%
21	808	5016175	5362475	6.9%	5446715	8.6%	5731708	14.3%
22	906	5093624	5583530	9.6%	5642083	10.8%	5797631	13.8%
23	917	4998220	5244388	4.9%	5264124	5.3%	5464788	9.3%
24	1006	5963813	6016913	0.9%	5936651	-0.5%	6167906	3.4%
25	1151	6280109	6929295	10.3%	6709239	6.8%	7074086	12.6%
26	1273	7262420	7531359	3.7%	7340057	1.1%	7918713	9.0%
27	1338	8032354	8319439	3.6%	8074112	0.5%	8473877	5.5%
28	1589	9207820	10237345	11.2%	10084827	9.5%	10223535	11.0%
29	1620	7897977	8791113	11.3%	8539931	8.1%	8970500	13.6%
30	1643	9436901	9831585	4.2%	9644512	2.2%	9899838	4.9%
31	1715	8221675	8973158	9.1%	8612254	4.8%	9280061	12.9%
32	2392	13014440	13814081	6.1%	13571809	4.3%	14035617	7.8%
33	2400	13186553	14322248	8.6%	14080616	6.8%	14227579	7.9%
34	2461	13943949	15052059	7.9%	13935503	-0.1%	14771469	5.9%
35	2787	14705924	15678163	6.6%	15075300	2.5%	15191596	3.3%
36	2978	16191512	17931378	10.7%	17329603	7.0%	18189724	12.3%
37	3086	15703759	16729867	6.5%	16025149	2.0%	16274521	3.6%
38	3350	18966851	19607273	3.4%	18836694	-0.7%	19794690	4.4%
39	4867	27452953	28200561	2.7%	27552238	0.4%	27967031	1.9%
40	4972	30247224	30997514	2.5%	30534998	1.0%	30018220	-0.8%
S0	稀釋液	8328	8413	1.0%	8391	0.8%	8545	2.6%
S0	稀釋液	8308	8379	0.9%	8282	-0.3%	8510	2.4%
	臨床相關系數r	0.996	0.998	4.9%	0.997	3.7%	0.997	6.8%

表2 進口R品牌-2103 ALP酶與西寶ALP測試IL-6精密度數據

序號	臨床樣本結果 pg/mL	進口R品牌-2103 ALP酶發光值	西寶ALP酶批次1 發光值	西寶ALP酶批次1與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次2 發光值	西寶ALP酶批次2與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次3 發光值	西寶ALP酶批次3與進口R品牌ALP酶發光值偏差
41	633	3845571	3949450	2.7%	3982366	3.6%	3968414	3.2%
		3917877	3974738	1.5%	3926552	0.2%	3886784	-0.8%
		3825928	3981113	4.1%	3912958	2.3%	3951069	3.3%
		3841732	3939175	2.5%	3846453	0.1%	3955463	3.0%
		3942931	3961147	0.5%	4091255	3.8%	3989053	1.2%
		3959783	3986780	0.7%	3929881	-0.8%	3997605	1.0%
		3944931	3951275	0.2%	3838714	-2.7%	3816604	-3.3%
		3976657	4081661	2.6%	3933418	-1.1%	4019027	1.1%
		3928228	4021525	2.4%	4093691	4.2%	3944612	0.4%
		4014240	3978290	-0.9%	4087308	1.8%	4116932	2.6%
	mean	3919788	3982515	1.6%	3964260	1.1%	3964556	1.2%
	SD	62723	41971		96710		79228
	CV	1.6%	1.1%		2.4%		2.0%

1.2 ALP標記PG I項目（SMCC法）

分別采用進口R品牌-2103 ALP酶及西寶自產三個批次ALP酶（貨號：DCE0108L）標記胃蛋白酶原（PGI）單抗（貨號：EKN0288E），搭配磁珠（貨號：DEG0800C）包被胃蛋白酶原（PGI）單抗（貨號：EKN0287E）測試40例臨床樣本（邁瑞PGI化學發光試劑盒賦值）及測試精密度。

由表3數據可知，進口R品牌-2103 ALP酶標記PGI抗體及西寶三個批次ALP酶標記PGI抗體測試臨床相關性r分別為0.982、0.986、0.985、0.983，表明西寶三個批次ALP酶標記PGI抗體測試臨床相關性良好；此外，西寶三個批次ALP酶分別與進口R品牌-2103 ALP酶測試PGI樣本的平均偏差分別為10.3%、6.4%、10.4%，表明西寶三個批次ALP酶與進口R品牌-2103 ALP酶差異很小。

由表4數據可知，進口R品牌-2103 ALP酶標記PGI抗體及西寶三個批次ALP酶標記PGI抗體測試PGI樣本精密度分別為1.5%、2.1%、1.7%、1.7%，表明西寶三個批次ALP酶標記PGI抗體測試臨床樣本精密度良好。

表3 進口R品牌-2103 ALP酶與西寶ALP測試PG I臨床樣本數據

序號	臨床樣本結果 ng/mL	進口R品牌-2103 ALP酶發光值	西寶ALP酶批次1 發光值	西寶ALP酶批次1與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次2 發光值	西寶ALP酶批次2與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次3 發光值	西寶ALP酶批次3與進口R品牌ALP酶發光值偏差
1	5.92	401464	442002	10.1%	430291	7.2%	469496	16.9%
2	39.6	3199323	3973566	24.2%	3626535	13.4%	3695776	15.5%
3	40.1	3595262	3823900	6.4%	3641734	1.3%	3776956	5.1%
4	41.4	3514499	3863739	9.9%	3686566	4.9%	3723622	6.0%
5	41.65	4297406	4551157	5.9%	4600087	7.0%	4615690	7.4%
6	43.9	4247408	4696695	10.6%	4526134	6.6%	4502288	6.0%
7	48.27	5016661	5379793	7.2%	5357017	6.8%	5577085	11.2%
8	59.59	6047655	6220034	2.9%	6130743	1.4%	6271263	3.7%
9	63.07	6191726	6714552	8.4%	6581244	6.3%	6748646	9.0%
10	65.79	6678406	7725101	15.7%	7675146	14.9%	7759540	16.2%
11	71.21	7318119	8285405	13.2%	7640666	4.4%	8083979	10.5%
12	71.24	8000448	9442209	18.0%	9013869	12.7%	9280189	16.0%
13	73.62	7523106	8270218	9.9%	8000410	6.3%	8612540	14.5%
14	77.43	7069697	7590059	7.4%	7411316	4.8%	7623158	7.8%
15	79.02	8655807	9138468	5.6%	9214973	6.5%	9079234	4.9%
16	81.03	9112084	9893103	8.6%	9481555	4.1%	9737635	6.9%
17	88.62	8440563	9097967	7.8%	9076898	7.5%	9156597	8.5%
18	90.70	9263666	10081980	8.8%	9628447	3.9%	9818393	6.0%
19	91.63	10211666	11248455	10.2%	10518376	3.0%	10985503	7.6%
20	92.29	8409493	10189549	21.2%	9913156	17.9%	10509499	25.0%
21	93.38	9369800	10081835	7.6%	9600133	2.5%	10038535	7.1%
22	96.84	10267586	11289053	9.9%	10968039	6.8%	11296835	10.0%
23	104.02	10867034	11605424	6.8%	11218455	3.2%	11791388	8.5%
24	105.05	12930162	14297444	10.6%	14030865	8.5%	14766310	14.2%
25	105.16	10030385	11532333	15.0%	11516308	14.8%	11489410	14.5%
26	105.99	11789598	12471587	5.8%	11931351	1.2%	13161046	11.6%
27	107.29	11553097	13241305	14.6%	12447242	7.7%	13219430	14.4%
28	110.47	13187680	13797645	4.6%	13060039	-1.0%	14782314	12.1%
29	113.04	9946242	12346848	24.1%	11159606	12.2%	11700477	17.6%
30	113.20	11601795	12396364	6.8%	11798328	1.7%	12683563	9.3%
31	115.12	12692504	13355756	5.2%	12712097	0.2%	13411513	5.7%
32	125.01	12762964	14251816	11.7%	14607248	14.5%	14431858	13.1%
33	125.46	12915163	14274538	10.5%	13371808	3.5%	13794939	6.8%
34	129.25	13000841	14225615	9.4%	14160303	8.9%	14281469	9.9%
35	132.22	14919851	16260773	9.0%	15569348	4.4%	15752080	5.6%
36	142.24	15712824	17785424	13.2%	16700165	6.3%	17359360	10.5%
37	142.82	15512075	16673442	7.5%	16313601	5.2%	16873988	8.8%
38	148.91	16918474	17955282	6.1%	17391399	2.8%	18284928	8.1%
39	172.15	16579359	18716715	12.9%	17307071	4.4%	18262788	10.2%
40	194.97	19647477	21400145	8.9%	21268634	8.3%	22286095	13.4%
S0	稀釋液	7089	7168	1.1%	6950	-2.0%	7189	1.4%
S0	稀釋液	6964	7032	1.0%	6886	-1.1%	9720	39.6%
	臨床相關系數r	0.982	0.986	10.3%	0.985	6.4%	0.983	10.4%

表4 羅氏ALP與西寶ALP測試PGI精密度數據

編號	臨床樣本結果 ng/mL	進口R品牌-2103 ALP酶發光值	西寶ALP酶批次1 發光值	西寶ALP酶批次1與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次2 發光值	西寶ALP酶批次2與進口R品牌ALP酶發光值偏差	西寶ALP酶批次3 發光值	西寶ALP酶批次3與進口R品牌ALP酶發光值偏差
41	73.41	7877919	8339922	5.9%	8293208	5.3%	8726632	10.8%
		7793302	8421988	8.1%	8600608	10.4%	8652174	11.0%
		7797740	8332840	6.9%	8564956	9.8%	8446239	8.3%
		7862110	8618334	9.6%	8213756	4.5%	8278822	5.3%
		8054737	8828634	9.6%	8515124	5.7%	8751994	8.7%
		7812837	8585820	9.9%	8394207	7.4%	8577867	9.8%
		7921397	8762108	10.6%	8300025	4.8%	8516509	7.5%
		8111839	8422760	3.8%	8281807	2.1%	8662195	6.8%
		7781729	8655701	11.2%	8198664	5.4%	8505551	9.3%
		7777237	8416163	8.2%	8326847	7.1%	8475487	9.0%
	mean	7879085	8538427	8.4%	8368920	6.2%	8559347	8.6%
	SD	118004	176444		144155		144485
	CV	1.5%	2.1%		1.7%		1.7%

Seebio® 堿性磷酸酶測試其他項目性能同樣良好

采用西寶ALP酶（貨號：DCE0108L）分別對25-羥基維生素D（雙抗夾心法）、幽門螺桿菌(HP.CagA)、胃蛋白酶原I（PGI）、D-二聚體（D-Dimer）、血栓調節蛋白（TM）、白介素-6（IL-6）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）、糖類抗原125(CA125)、肌紅蛋白（Myo）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等項目進行驗證，臨床效果表現良好，具體詳情請參考西寶生物相關免疫診斷解決方案。

西寶生物可免費提供堿性磷酸酶ALP標記工藝（SMCC法），具體詳情詢Seebio相關人員

堿性磷酸酶案例驗證相關核心試劑

產品名稱	貨號	推薦配對
胃蛋白酶原（PGI）抗體	EKN0287E	胃蛋白酶原（PGI）單抗（貨號：EKN0287E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原（PGI）單抗（貨號：EKN0288E）標記堿性磷酸酶
胃蛋白酶原（PGI）抗體	EKN0288E
胃蛋白酶原（PGI）抗原	EKY0731B	校準、質控抗原
胃蛋白酶原（PGI）單抗（貨號：EKN0287E）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1331H	濃縮液
胃蛋白酶原（PGI）單抗2（貨號：EKN0288E）標記堿性磷酸酶濃縮液	DKY1331I	濃縮液
白介素-6（IL-6)抗體	EKY0129Z	白介素-6（IL-6)抗體1（貨號：EKY0129Z）包被羧基磁珠+白介素-6（IL-6)抗體2（貨號：EKY0129D）標記堿性磷酸酶
白介素-6（IL-6)抗體	EKY0129D
白介素6 (IL-6)重組抗原	EKY0140B	校準、質控抗原
白介素-6（IL-6)單抗1（貨號：EKY0129Z）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1321F	濃縮液
白介素-6（IL-6)單抗2（貨號：EKY0129D）標記堿性磷酸酶濃縮液	DKY1321G	濃縮液

其他相關試劑訂購詳情：

產品編號	產品名稱	訂購規格
DCE0108L	Seebio® 重組堿性磷酸酶（高活性）	5mg，10mg，100mg
DCD0517B	AMPPD 發光底物液（即用型）	100ml
DEG0800C	羧基磁性微球，1.5um	10ml
DEG0814A	鏈霉親和素磁性微球，1.5um	10ml
ECV0336B	生物素Biotin-NHS	50mg，100mg
EJL1164A	4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷羧酸 -N-琥珀酰亞胺酯（SMCC）	250mg
DCS0005C	4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽（Sulfo-SMCC）	25mg
AJL0806C	2-亞氨基硫雜環戊烷鹽酸鹽	100mg
AJL0617A	馬來酰亞胺	5g
ACP0005A	甘氨酸	500g、1kg，25kg
DCL0001A	牛血清白蛋白(第五組分)	100g，250g，500g
DCL0001B	牛血清白蛋白(第五組分,無蛋白酶)	5g，100g，500g
DCL0001D	牛血清白蛋白(第五組分,無蛋白酶,低脂肪酸)	25g，100g，500g
DCL0001S	牛血清白蛋白(第五組分)	100g，500g，1kg
DCL0001T	牛血清白蛋白(無蛋白酶，低脂肪酸，低IgG，低內毒素)	100g，1kg
AYY2828A	酪蛋白	25g，100g
ACH0027A	Tween 20	100ml，500ml，1L，5L
ACH0028A	Tween 80	100ml，500ml，1L，5L
ACH0026A	Triton X-100	100ml、500ml、1L
ACH0056D	Triton X-450	50ml，500ml
ACH0003B	聚環氧乙烯月桂酰醚,Brij-35	100g，500g，1kg
ACC0030B	三羥甲基氨基甲烷<結晶>(Tris base)	50g，100g，1kg
ACC0016A	2-(N-嗎啉代)乙烷磺酸一水(MES)	100g，500g，1kg
ACC0017A	3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)	100g，1kg
ACC0013A	N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)	25g，500g，1kg
ACN0037B	Krovin 300防腐劑	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0917A	Krovin 360防腐劑	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0046A	Krovin 500防腐劑	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0043B	Krovin 950防腐劑	25ml，100ml，500ml，5L
DJL0145B	三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽（TCEP）	5g，100g，500g