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多糖糖基化和糖鏈分析常規(guī)問題

來源：西寶生物官網(wǎng)www.seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時間：2015-01-04 14:51:00【大中小】

FAQs

Q: 如何從糖蛋白中釋放N-多糖糖鏈?

A: 目前普遍采用2種技術(shù)用于釋放糖蛋白N-多糖糖鏈用于糖基化分析 - 肼解和內(nèi)切糖苷酶處理。《糖基化分析指南》涵蓋了一些在選擇這些釋放方法時的注意事項。

Q: 如何制止唾液酸從糖鏈上掉落?

A: 唾液酸是棘手的事情。根據(jù)我們的經(jīng)驗，多糖樣品純度越高，唾液酸殘余就越容易掉落。雖然有些靈敏的預(yù)防措施，比如：

避免pH酸性和升溫。盡可能保持pH在6-9范圍，溫度低于30°C。
在使用離心或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥糖鏈樣品時應(yīng)小心操作，保持溫度低于25°C。冷凍干燥(凍干)對于防止唾液酸降解更為有效，但存在更大的風險是，在真空放空時，可能導(dǎo)致樣品全部損失。

Q: 對于多糖糖鏈分析而言，較佳的熒光標記是什么?

A: 下表展示了在使用HPLC, CE 和MS進行糖基化分析時,常用的熒光標記:

多糖熒光標記	主要應(yīng)用	熒光波長和常規(guī)分析方法
2-AB (2-氨基苯甲酰胺)	使用HPLC/MS分析寡糖	Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm HPLC (amide, C18, AEX, HPAE-FD, PGC), ES-MS, MALDI-MS
2-AA (2-氨基苯甲酸)	使用HPLC/MS分析寡糖使用HPLC分析單糖	Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm Oligosaccharides: HPLC (amide, C18, AEX, PGC), ES-MS, MALDI-MS Monosaccharides: HPLC (C18)
APTS (8-氨基芘-1,3,6-三磺酸)	使用CE分析寡糖	Λex = 455 - 488 nm, Λem = 510 - 520 nm CE
AA-Ac (3-(乙酰氨基)-6-氨基吖啶)	使用HPLC分析寡糖	Λex = 382, 445 nm, Λem = 525 nm HPLC (amide, C18, AEX), ES-MS, MALDI-MS
DMB (1,2-二氨基-4,5-亞甲二氧基苯)	使用HPLC分析人以及非人類唾液酸	Λex = 373 nm, Λem = 448 nm HPLC (C18)

關(guān)鍵詞: AEX = 陰離子交換, HPAE-FD = 強堿性陰離子交換帶熒光檢測, PGC = 多孔石墨烯, HPLD = 高效液相色譜, MS = 質(zhì)譜 , MALDI = 基質(zhì)輔助激光解吸附質(zhì)譜, ES = 電噴霧質(zhì)譜, CE = 陽離子交換高效液相色譜