【技術(shù)問(wèn)答】Ludger DMB唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒問(wèn)題集錦
Ludger DMB唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒FAQs
Q: 為什么要同時(shí)使用beta-巰基乙醇和亞硫酸鈉，兩個(gè)都是抗氧化的？
A: Sodium Dithionite (Reductant) 亞硫酸鈉是作為還原劑存在的。巰基乙醇是溶解還原劑的。
Q: 如果β巰基乙醇是用來(lái)溶解低亞硫酸鈉的話，為什么不直接用水溶解？是否還有別的作用？
A: 巰基乙醇可以讓標(biāo)記后的產(chǎn)品更穩(wěn)定。
Q: 硫酸或醋酸或唾液酸酶能不能將抗體分子上唾液酸完全解離或切除下來(lái)？假如可以，用什么方法可以證明它們能將抗體分子上唾液酸完全解離或切除下來(lái)？
A: 作為陽(yáng)性對(duì)照，我們建議使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白，我們同樣建議使用純化的LudgerBioQuantTM糖肽標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)作為陽(yáng)性對(duì)照。這個(gè)糖肽標(biāo)準(zhǔn)品（貨號(hào): BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個(gè)復(fù)雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個(gè)N-乙酰神經(jīng)氨酸。使用此標(biāo)準(zhǔn)品可以檢查聚糖釋放、標(biāo)記和回收的有效性，并可增強(qiáng)您的唾液酸測(cè)量準(zhǔn)確性。
Q: 唾液酸分NeuAc和NeuGC，我檢測(cè)時(shí)NeuGC的量很少，能否合并計(jì)入到唾液酸的含量中？
A: 不可以。NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神經(jīng)氨酸）的定量分析是監(jiān)管機(jī)構(gòu)在生物制藥表征的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格指南中提出的一個(gè)要求。特別是，人類(lèi)和非人類(lèi)的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分別)相對(duì)水平測(cè)定是非常重要的，因?yàn)橛行┎∪擞懈咚降目股窠?jīng)氨酸（anti-NeuGc）抗體，這可導(dǎo)致中和反應(yīng)和快速清除含有神經(jīng)氨酸（NeuGc）的生物藥品 (Nguyen等,2005)。由于唾液酸（NeuAc）和神經(jīng)氨酸（NeuGc）在分析糖蛋白中具有重要意義，它通常被認(rèn)為是生物治療藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)。
Q: 關(guān)于非人源的N-羥乙酰神經(jīng)氨酸在唾液酸中的含量限定，國(guó)際上有沒(méi)有相關(guān)的資料參考，因?yàn)镹-羥乙酰神經(jīng)氨酸對(duì)人體有害，在新藥研發(fā)中，有沒(méi)有對(duì)它的含量限定標(biāo)準(zhǔn)？
A:目前沒(méi)有這種NGNA含量的國(guó)際規(guī)定，只能是廠家根據(jù)產(chǎn)品性質(zhì)及相關(guān)資料進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。非人唾液酸N-羥乙酰神經(jīng)氨酸含量當(dāng)然是越低越好。國(guó)際上目前還沒(méi)有這個(gè)具體規(guī)定。但這個(gè)問(wèn)題其實(shí)并不是問(wèn)題。因?yàn)镃HO細(xì)胞本身低表達(dá)唾液酸，一般不到5%，并且主要是以人源的N-乙酰神經(jīng)氨酸為主。
Q: 用 LT-KDMB-A1 DMB 唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒和超高壓色譜柱LS-UR2-2.1x100 ，空白是跟樣品平行處理的，洗脫程序也是按照說(shuō)明書(shū)程序，加了個(gè)洗脫程序。做出來(lái)的圖譜：溶劑和樣品峰有重疊，在2.5min左右；而ludger的圖譜：溶劑和樣品峰是分開(kāi)的。如果使溶劑峰和樣品峰分來(lái)，是否能通過(guò)調(diào)整色譜條件和流動(dòng)相，給些建議？
A: 將用50%乙腈洗脫改成現(xiàn)在用90%乙腈洗脫，溶劑和樣品峰可以分開(kāi)了，原因可能是之前用50%乙腈沒(méi)有洗脫干凈，柱子里有殘留溶劑峰。
Q: DMB 唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒(# LT-KDMB-A1 )夠用22個(gè)樣品，收集夠20個(gè)左右的樣品要1-2個(gè)月，時(shí)間比較長(zhǎng)，問(wèn)試劑盒能否分批使用，還是要一次用完？
A: DMB試劑本身不穩(wěn)定，要在用的當(dāng)天現(xiàn)配現(xiàn)用。即不能分批使用，要一次用完。
Q: 同時(shí)做20個(gè)樣品進(jìn)樣，第一天和第二天跑出來(lái)的圖譜 重復(fù)性不太好，會(huì)有偏差，這個(gè)有沒(méi)有方法避免？
A: 具體偏差在多少？我們現(xiàn)行的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)將偏差設(shè)為±20%，如果在這個(gè)范圍之內(nèi)，是屬于正常現(xiàn)象。
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