尼龍毛柱(Nylon Wool Fiber Syringe)-T細胞分離用

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2017-02-10 10:43:00【大中小】

  西寶生物提供商品化的尼龍毛柱(Nylon Wool Fiber Syringe)，供T細胞分離用，無需自行滅菌，使用方便，詳情致電400-021-8158！
尼龍毛柱法分離T細胞原理
  尼龍毛纖維可用于從周圍血中分離白細胞和從B細胞中分離T細胞。利用的是尼龍毛對B細胞的吸附力，粒細胞和B細胞會粘在纖維上，而T細胞和其他細胞則不會。

  產(chǎn)品描述
采用Becton Dickinson的一次性的10cc塑料注射器，預(yù)裝0.5g細絲狀的尼龍毛（大約裝至5CC線上）；
即用型，已滅菌，10支裝一盒；
尼龍毛柱的柱塞裝置用于洗脫粘連的B細胞，單路旋塞用于控制T細胞洗滌、孵育、洗脫的步驟。

細胞分離的操作過程
1、從包裝中取出注射器和柱塞，取出旋塞，并安裝在注射器的魯爾接頭。
2、在37°C下用選定培養(yǎng)基洗滌柱子，洗滌時輕輕按動柱塞以確保羊毛浸潤且沒有氣泡。推薦的培養(yǎng)基包括含5%熱滅活胎牛血清（FCS）的Dulbecco PBS，含10%小牛血清的Hank平衡鹽溶液（HBSS），含10%胎牛血清（FCS）的RPMI-1640，含10%胎牛血清（FCS）的EBSS，含10%胎牛血清（FCS）的McCoy’s 5A培養(yǎng)基。
3、關(guān)閉旋塞，預(yù)裝柱在37°C培養(yǎng)1小時。
4、打開旋塞，從尼龍毛柱的頂部排干培養(yǎng)基后關(guān)閉。
5、每根柱子里加2×108活細胞到2ml培養(yǎng)基中。打開旋塞并逐漸排干培養(yǎng)基，直至細胞完全進入預(yù)裝的尼龍毛中。關(guān)閉旋塞。
6、用2ml培養(yǎng)基洗滌柱子的頂部，并允許洗液進入預(yù)裝尼龍毛中。關(guān)閉旋塞。
7、添加2~5ml培養(yǎng)基，以確保尼龍毛頂部被培養(yǎng)基覆蓋。
8、在37°C培養(yǎng)1小時.
9、洗滌兩次，收集不粘的T細胞。不要推柱塞！
10、收集粘性的B細胞時，可以添加培養(yǎng)基直至充滿柱子，輕敲柱子使細胞脫離尼龍毛。推柱塞，并重復(fù)兩次。
11、在1200rpm離心10分鐘收集細胞，上清液棄去。
12、在大約10ml相同的培養(yǎng)基重新懸浮細胞顆粒。