PROTEOSTAT(R)蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2023-03-06 10:37:00【大中小】

PROTEOSTAT^® 蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒

確定蛋白質(zhì)重折疊優(yōu)化條件和功能蛋白峰值回收率

●　不僅僅是針對(duì)重折疊 - 通過(guò)完整的工作流程，使用PROTEOSTAT®染料確定非通路蛋白質(zhì)聚集的條件

●　一整套優(yōu)化的篩選試劑和有助于蛋白質(zhì)重折疊的條件。

●　使用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)值（DOE）進(jìn)行快速微孔板篩選，以確定對(duì)蛋白質(zhì)形成至關(guān)重要的參數(shù)。

PROTEOSTAT^® 蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒，提供了統(tǒng)一采用分?jǐn)?shù)因子矩陣的分析方法，便于在不同緩沖液體系的蛋白質(zhì)重折疊的參數(shù)。它也是一種使用專(zhuān)有紅色發(fā)射光聚集敏感的分子轉(zhuǎn)子染料監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)聚集的簡(jiǎn)單統(tǒng)一的分析方法。對(duì)于低熒光讀數(shù)的特定樣品（因此聚集成分少），可采用傳統(tǒng)的根據(jù)酶活測(cè)定重折疊成功率的方法進(jìn)行驗(yàn)證。

圖1：在氧化還原環(huán)境下重新折疊溶菌酶。根據(jù)DOE矩陣（產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，表1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。具體而言，20 mg/mL溶菌酶首先在4°C的6M胍溶液中變性18小時(shí)。然后，將變性溶菌酶以1:20稀釋到不同的折疊緩沖液中，并在4°C下培養(yǎng)過(guò)夜。進(jìn)行PROTEOSTAT®蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏分析時(shí)，將1:20稀釋的重折疊溶液直接添加到含染料的PROTEOSTAT®分析緩沖液中，并測(cè)定熒光強(qiáng)度（Ex=550 nm，Em=610 nm）。折疊緩沖液中溶菌酶的酶活，是使用20µg/mL溶血微球菌（Micrococcus lysodeikticus）細(xì)胞壁測(cè)量，該細(xì)胞壁被熒光素過(guò)量標(biāo)記，引發(fā)染料淬滅。當(dāng)溶菌酶作用于該底物時(shí)，細(xì)胞壁上未被染色標(biāo)記的片段被釋放。測(cè)定熒光強(qiáng)度增加（Ex/Em 490/520nm）。經(jīng)PROTEOSTAT®分析緩沖液中稀釋的天然蛋白質(zhì)可作為聚集和活性測(cè)定的參照。具有高聚集信號(hào)的重折疊溶液通常具有低酶活性，因此應(yīng)避免。1A-15A：含DTT；1B-15B：含GSH/GSSG。

圖2:確定重折疊緩沖液13B具有高活性和低熒光，如圖1所示，并被選來(lái)評(píng)估溶菌酶重折疊時(shí)的賦形劑的影響。賦形劑單獨(dú)添加到含GSH/GSSG的折疊緩沖液中，并分析其聚集和活性，如圖1所示。結(jié)果表明，氯化鎂在z重折疊緩沖液13B中促進(jìn)重折疊結(jié)果較好，聚集趨勢(shì)較小。

◆產(chǎn)品詳情

應(yīng)用特點(diǎn)	PROTEOSTAT®蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒，提供了統(tǒng)一采用分?jǐn)?shù)因子矩陣的分析方法，便于在不同緩沖液體系的蛋白質(zhì)重折疊的參數(shù)。它也是一種使用專(zhuān)有紅色發(fā)射光聚集敏感的分子轉(zhuǎn)子染料監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)聚集的簡(jiǎn)單統(tǒng)一的分析方法。
品質(zhì)保證	按手冊(cè)所述的規(guī)程，將變性溶菌酶重折疊以比較不同緩沖液中的相對(duì)熒光。
數(shù)量	192次反應(yīng)
使用/穩(wěn)定性	如果儲(chǔ)存得當(dāng)，試劑盒組分自收到之日起可穩(wěn)定一年。
儲(chǔ)存條件	避光。避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸方式	干冰運(yùn)輸
儲(chǔ)存溫度	-20°C
組分	PROTEOSTAT® 檢測(cè)試劑, 22 µl 10X PROTEOSTAT® 分析緩沖液, 1 x 2 ml 2X 折疊緩沖液 1-15, 10 ml each 溶菌酶標(biāo)準(zhǔn), 10 mg 變性劑: 6M 鹽酸胍 (GdnHCl), Tris鹽酸鹽l (pH 8), 14 ml 100 mM DTT, 1 ml GSH, 46.1 mg GSSG, 18.4 mg 10 mM 聚乙二醇, 1 ml 500 mM EDTA, 1 ml 400 mM 氯化鈣, 1 ml 400 mM 氯化鎂, 1 ml 1 M 氯化鈉, 1 ml 0.1% 吐溫20, 1 ml 1.2 M 蔗糖, 1 ml α-環(huán)糊精 (200 mg/ml), 1 ml
技術(shù)信息/產(chǎn)品說(shuō)明	PROTEOSTAT®蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒是PROTEOSTAT®試劑和分析試劑盒產(chǎn)品線一員，已在蛋白質(zhì)聚集應(yīng)用中進(jìn)行了廣泛測(cè)試。PROTEOSTAT®試劑和試劑盒較適合使用顯微鏡、流式細(xì)胞儀、微板讀數(shù)器和HCS/HTS進(jìn)行的蛋白質(zhì)分析，對(duì)一致性和再現(xiàn)性有要求。
監(jiān)管狀態(tài)	RUO - 僅供研究使用

◆參考文獻(xiàn)

Aggregation analysis of therapeutic proteins, part 1: T. Arakawa, et al.; Bioprocess International 4 (10), 32 (2006),
Investigation of protein refolding using a fractional factorial screen: A study of reagent effects and interactions: M. Willis, et al.; Protein Sci. 14, 1818 (2005),
Structure of the cross-beta spine of amyloid-like fibrils: R. Nelson, et al.; Nature 435, 773 (2005),
High-throughput automated refolding screening of inclusion bodies: R. Vincentelli, et al.; Protein Sci. 13, 2782 (2004),

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	包裝
ENZ-51040-KP002	PROTEOSTAT^® 蛋白質(zhì)重折疊和聚集靈敏試劑盒 PROTEOSTAT^® Protein refolding and aggregation sensing kit	2x96 wells

◆相關(guān)產(chǎn)品

人IgG多抗

◆產(chǎn)品詳情

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濃度	1mg/ml
來(lái)源	兔
免疫原	人免疫球蛋白G
物種反應(yīng)性	人
應(yīng)用	WB
純化細(xì)節(jié)	蛋白A親和純化
形式	液體。溶于含有10ppm卡松防腐劑的PBS緩沖液中。
使用/穩(wěn)定性	在4°C下可穩(wěn)定1個(gè)月，在-20°C下可穩(wěn)定至少12個(gè)月。
處理	避免反復(fù)凍融
運(yùn)輸	冰袋運(yùn)輸
短期儲(chǔ)存	+4°C
長(zhǎng)期儲(chǔ)存	-20°C
監(jiān)管狀態(tài)	RUO - 僅供研究使用

◆產(chǎn)品文獻(xiàn)參考

Th17 micro-milieu regulates NLRP1-dependent caspase-5 activity in skin autoinflammation.; S. Zwicker, et al.; PLoS One 12, e0175153 (2017)

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	包裝
ENZ-ABS264-1000	人IgG多抗 IgG (human) polyclonal antibody	1 ml

◆相關(guān)產(chǎn)品

PROTEOSTAT® Protein aggregation assay PROTEOSTAT®蛋白聚集分析試劑盒
用于可見(jiàn)及亞可見(jiàn)顆粒蛋白質(zhì)聚集的定量檢測(cè)
ENZ-51023-KP002	96 tests×2
ENZ-51023-KP050	50 tests
PROTEOSTAT® Protein aggregation standards PROTEOSTAT®蛋白聚集檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品
市售蛋白質(zhì)聚集測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品
ENZ-51039-KP002	2x96 wells
PROTEOSTAT® Thermal shift stability assay kit PROTEOSTAT®熱轉(zhuǎn)移穩(wěn)定性測(cè)定試劑盒
用于與pH、離子強(qiáng)度和濃度關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性快速篩選。
ENZ-51027-K400	400 tests
ENZ-51027-K100	100 tests
PROTEOSTAT® Protein refolding and aggregation sensing kit PROTEOSTAT® 蛋白質(zhì)重折疊和聚集敏感試劑盒
用于確定蛋白質(zhì)重折疊適宜條件和功能蛋白較大回收率
ENZ-51040-KP002	2x96 wells
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靈敏的監(jiān)測(cè)污染殘留用比色法酶聯(lián)免疫試劑盒（9.01 pg/ml）
ADI-900-057	96 wells
E. coli host cell protein ELISA kit 大腸桿菌宿主細(xì)胞蛋白ELISA試劑盒
靈敏的定量檢測(cè)大批量大腸桿菌系表達(dá)產(chǎn)品的宿主細(xì)胞蛋白污染(30 ng/ml)
ENZ-KIT127-0001	96 wells
E. coli host cell protein standards 大腸桿菌宿主細(xì)胞蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
用于蛋白質(zhì)印跡內(nèi)部對(duì)照或ELISA的定量分析的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。
ENZ-PRT121-0050	50 μg
E. coli host cell proteins polyclonal antibody 大腸桿菌宿主細(xì)胞蛋白多抗
ENZ-ABS262-0100	100 μg
E. coli host cell proteins polyclonal antibody (biotin conjugate) 大腸桿菌宿主細(xì)胞蛋白多抗（生物素標(biāo)記）
ENZ-ABS263-0100	100 μg
CHO host cell protein ELISA kit CHO宿主細(xì)胞蛋白ELISA試劑盒
靈敏的定量檢測(cè)大批量中國(guó)倉(cāng)鼠（CHO）系表達(dá)產(chǎn)品的宿主細(xì)胞蛋白污染(10 ng/ml)
ENZ-KIT128-0001	96 wells
CHO host cell protein standards CHO 宿主細(xì)胞蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
用于蛋白質(zhì)印跡內(nèi)部對(duì)照或ELISA的定量分析的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。
ENZ-PRT122-0050	50 μg
CHO host cell proteins polyclonal antibody CHO宿主細(xì)胞蛋白多抗
ENZ-ABS260-0100	100 μg
CHO host cell proteins polyclonal antibody (biotin conjugate) CHO宿主細(xì)胞蛋白生物素標(biāo)記多抗
ENZ-ABS261-0100	100 μg
IgG (human) polyclonal antibody 人IgG多抗
ENZ-ABS264-1000	1 mL