用于檢測【甲氧基聚乙二醇】和【聚乙二醇化蛋白】的ELISA試劑盒（MP-0001-1Kit）

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-08-28 10:51:00【大中小】

用于檢測【甲氧基聚乙二醇】和【聚乙二醇化蛋白】的ELISA試劑盒（MP-0001-1Kit）

甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒(貨號：MP-0001-1Kit)的應用： 用于檢測分子量大于等于2kDa 游離甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白，試劑盒只用于科研，不可用于診斷或治療

甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒(貨號：MP-0001-1Kit)產品介紹：
治療蛋白通過結合甲氧基聚乙二醇鏈實現聚乙二醇化，蛋白聚乙二醇化后，可減緩蛋白水解和循環系統清除速率來延長半衰期，因此可以增加其療效。評估聚乙二醇化蛋白的藥效，通常情況下應對多肽鏈的特異性進行分析。但這些方法需要消耗大量時間，且建立目標蛋白的ELISA很昂貴。甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒(貨號：MP-0001-1Kit)可以檢測甲氧基聚乙二醇鏈，因此適合評估聚乙二醇化生物制劑和甲氧基聚乙二醇的藥效。

該檢測試劑盒基于夾心ELISA原理，它應用了兩個抗-PEG小鼠單克隆抗體。針對PEG的聚乙二醇主鏈的特異性抗體包被在96孔板上，用于捕獲。另外一種專一性抗體結合了辣根過氧化物酶，與甲氧基聚乙二醇的末端甲氧基發生特異性結合，進行檢測。

甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒可用于檢測游離甲氧基聚乙二醇（圖1）和帶有一個或多個甲氧基聚乙二醇鏈的聚乙二醇化蛋白（圖2）。不過，它不能檢測缺少末端甲氧基的PEG鏈。試劑盒的靈敏度隨著甲氧基聚乙二醇鏈的長度而變化，因此甲氧基聚乙二醇或聚乙二醇化的分子可以生成一個標準曲線。研究表明，甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒可識別分子量大于等于2kDa的甲氧基聚乙二醇。試劑盒提供5kDa 甲氧基聚乙二醇-氨的標準品，可方便用戶去檢測試劑盒的性能。

甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒(貨號：MP-0001-1Kit)分析方法：
首先將100ul的HRP抗-甲氧基聚乙二醇加入到微孔板中，然后加入100ul的稀釋樣品和標準品，在微孔板振蕩器上混勻1小時。沖洗微孔以后，加入100ul的TMB到微孔中，孵育20分鐘，結果會產生藍色。加入1N HCL 100ul終止反應，藍色會變為黃色，檢測其在450nm處的吸光值。甲氧基聚乙二醇的濃度從標準曲線上獲得。

甲氧基聚乙二醇 ELISA試劑盒(貨號：MP-0001-1Kit)包含以下內容：

抗-PEG包被的96孔板（12個可拆開的條，每條8孔），在-20℃下儲存
HRP 抗-甲氧基聚乙二醇復合物，25ul（1瓶）。在-20℃下儲存
甲氧基聚乙二醇稀釋液，50ml
5kDa 甲氧基聚乙二醇-氨標準品，100ul（1瓶）。在-20℃下儲存
甲氧基聚乙二醇清洗緩沖液，60ml
TMB試劑，11ml
終止液，11ml

需提供以下試劑或耗材：

移液器和槍頭
蒸餾水或去離子水
聚丙烯或玻璃管
漩渦混合器
微孔板振蕩儀（混合速度，150轉/分鐘）
平板墊圈
在450nm處光密度在0-4的平板閱讀器
繪圖軟件

標準液的制備：

1、標記8支聚丙烯管或玻璃管，濃度為20,10,5,2.5,1.25,0.625，0.3125和0ng/ml
2、制備20ng/ml的標準品，標記在5kDa 甲氧基聚乙二醇標準品標簽上
3、加入250ul的稀釋液到管中，標記為10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125和0ng/ml
4、吸取250ul的20ng/ml 甲氧基聚乙二醇標準品到管子中，標記10ng/ml，并混合。此試劑盒提供10ng/ml PEG-BSA標準品。
5、通過連續稀釋相同地制備5,2.5,1.25,0.625和0.3125ng/ml的標準品

分析過程：

1、保護支持板上合適數量的包被孔
2、加入100ul的HRP 抗-甲氧基聚乙二醇復合物到孔中
3、吸取100ul標準品和樣品到孔中（建議標準品和樣品分別一式三份）
4、在150轉每分鐘的微孔板振蕩器上室溫（25℃）孵育1小時
5、使用一個平板墊圈，清洗孔6次，每孔加入400ul的清洗液
6、吸取100ul的TMB試劑到每個孔中
7、在150轉/分鐘的微孔板振蕩器上輕輕地混合20分鐘
8、加入100ul的終止液到每個孔中終止反應
9、輕輕混合直到藍色變為黃色
10、5分鐘內讀取450nm處的吸收值

結果計算：

1、讀取參考標準品和樣品在450nm處的平均吸光值
2、用平均吸光值和濃度值做標準曲線，Y軸是吸光值，X軸是濃度
3、用合適的模型和電腦繪圖軟件導入數據
4、使用每個樣品的平均吸光值來確定甲氧基聚乙二醇或聚乙二醇化蛋白的濃度值
5、濃度乘以稀釋因子計算出血清或血漿樣品中聚乙二醇化蛋白的實際濃度
6、如果樣品的吸光度值不在標準曲線范圍，樣品需要重新稀釋和檢測

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