無縫克隆試劑盒

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時間：2012-08-22 10:51:00【大中小】

傳統(tǒng)的PCR產(chǎn)物克隆方法主要有兩種：一種是PCR引物設(shè)計時引入載體上的酶切位點，PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后定向克隆到目的載體上；另一種是TA載體連接。這兩種方法費時費力，過程繁冗。

無縫克隆和組裝技術(shù)是一種新的、快速、簡潔的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在質(zhì)粒的位點進(jìn)行一個或多個目標(biāo)DNA的片斷的插入，而不需要限制性內(nèi)切酶和連接酶。突破傳統(tǒng)的雙酶切再加上連接，只需要一步重組法，即可得到高效率克隆的重組載體。上海西寶生物提供無縫克隆試劑盒，提高您的工作效率，讓您的工作變得輕松。

技術(shù)原理：

基因克隆的引物設(shè)計及目的DNA片段的擴(kuò)增，與常規(guī)PCR法是相同的。差異在于載體末端和引物末端應(yīng)具有15-20個同源堿基，由此得到的PCR產(chǎn)物兩端便分別帶上了15-20個與載體序列同源性的堿基。

技術(shù)特點：

1、位點選擇靈活：載體任意位置基因克隆；
2、快速簡便：大約30分鐘完成載體構(gòu)建；
3、精確：不需要增加額外的程序；
4、克隆效率高，陽性克隆高達(dá)90%以上；
5、一次進(jìn)行多片段目的基因的重組

引物設(shè)計方法：

無縫克隆操作過程：

1. 采用酶切或PCR擴(kuò)增方法將就體線性化。
2. 使用設(shè)計好的引物進(jìn)行目的DNA片段的PCR擴(kuò)增（引物設(shè)計見說明書）。
3. 將目的DNA片段和線性化載體以摩爾比2.1加到試管中進(jìn)行重組反應(yīng)：
a. 反應(yīng)液 15μl
b. 線性化載體 x μl
c. PCR片斷 x μl
d. H2O x μl
-------------------------
總體積 20 μl
4. 混勻后在50℃孵育30分鐘，然后轉(zhuǎn)移到冰上。 5. 使用5μl反應(yīng)液轉(zhuǎn)化到感應(yīng)態(tài)細(xì)菌中。
詳細(xì)操作步驟參見具體說明書。

應(yīng)用：

1、片斷克隆，片斷組裝，突變構(gòu)建；
2、基因表達(dá)，成膜，小RNA等功能研究；
3、蛋白質(zhì)突變研究；
4、應(yīng)用合成生物學(xué)；
5、代謝工程，菌株改造。

訂購信息：

商品型號	品名	規(guī)格	價格
DDM0066A-24Reaction	無縫克隆試劑盒	24個反應(yīng)	詢價
DDM0066A-48Reaction	無縫克隆試劑盒	48個反應(yīng)	詢價
DDM0074A-25Test	無縫克隆試劑盒	25次	詢價
DDM0074A-50Test	無縫克隆試劑盒	50次	詢價
DDM0078A-20Test	無縫克隆試劑盒	20次	詢價
DDM0078A-100Test	無縫克隆試劑盒	100次	詢價
DDM0079A-20Test	無縫克隆和組裝試劑盒	20次	詢價
DDM0080A-20Test	用于無縫克隆試劑盒的線性pUC19L載體	20次	詢價