定量檢測(cè)血清和血漿中抗-PEG IgM的ELISA試劑盒

來(lái)源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時(shí)間：2013-10-11 11:36:00【大中小】

將聚乙二醇鏈結(jié)合到生物制劑上，這個(gè)過(guò)程叫做生物制劑的PEG化。蛋白PEG化后可通過(guò)減緩蛋白水解和從免疫系統(tǒng)中遮蔽來(lái)延長(zhǎng)半衰期。然而，重復(fù)注射PEG化蛋白可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗-PEG抗體，使得清除的速率加快。為了幫助這一領(lǐng)域的研究，西寶生物供應(yīng)小鼠，大鼠，猴抗-PEG IgM ELISA試劑盒，定量檢測(cè)小鼠，大鼠和猴中抗-PEG IgM的濃度。

檢測(cè)原理：

小鼠抗-PEG IgM檢測(cè)試劑盒基于固相酶聯(lián)免疫吸附原理。此試劑盒使用固定的單mPEG化BSA（20kDa PEG）作為捕獲抗原（包被在微孔上），辣根過(guò)氧化物酶抗-小鼠IgM抗體復(fù)合物用于檢測(cè)。稀釋血清或血漿樣品，同時(shí)在微孔板中培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)品1小時(shí)。然后，清洗孔，加入HRP復(fù)合物孵育30分鐘。抗-PEG IgM分子被夾在固定的PEG和檢測(cè)抗體復(fù)合物之間。沖洗微孔去掉未結(jié)合的HRP標(biāo)記的抗體，加入TMB試劑，室溫下孵育20分鐘，結(jié)果產(chǎn)生藍(lán)色。加入終止液反應(yīng)終止，顏色變?yōu)辄S色，檢測(cè)在450nm處的光密度。抗-PEG IgM的濃度與在450nm處的吸光度值成正比。

此試劑盒主要檢測(cè)抗PEG聚乙二醇主鏈的抗體。

試劑盒中包含以下內(nèi)容：

PEG-BSA包被的96孔板（12條，每條8個(gè)孔），在-20℃下儲(chǔ)存
抗-小鼠IgM HRP復(fù)合物，50ul 。在-20℃下儲(chǔ)存
參考標(biāo)準(zhǔn)品（冷凍干燥），2瓶。在-20℃下儲(chǔ)存
20×HRP PEG沖洗液，50ml
HRP PEG稀釋液，50ml
TMB試劑，11ml
終止液（1N HCL），11ml

需提供以下試劑或耗材：

移液器和槍頭
蒸餾水或去離子水
聚丙烯或玻璃管
漩渦混合器
吸水紙或紙巾
微孔板培養(yǎng)儀（混合速度，150轉(zhuǎn)/分鐘）
平板墊圈
在450nm處光密度在0-4的平板閱讀器
繪圖軟件

分析過(guò)程：

1、保護(hù)支持板上合適數(shù)量的包被孔

2、吸取100ul標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋樣品到孔中（建議測(cè)試樣品一式三份）

3、在100-150轉(zhuǎn)每分鐘的微孔板振蕩器上室溫（18-25℃）孵育1小時(shí)

4、使用1×清洗液清洗微孔5次，整個(gè)清洗過(guò)程要盡快完成

5、在吸水紙或紙巾上急劇地敲擊孔，去掉剩余的清洗液

6、吸取100ul稀釋的HRP復(fù)合物到每個(gè)孔中

7、在100-150轉(zhuǎn)/分鐘的微孔板振蕩器上，室溫（18-25℃）孵育30分鐘

8、按照以上第4步或第5步清洗

9、吸取100ul的TMB試劑到每個(gè)孔中。

10、在微孔板振蕩器100-150轉(zhuǎn)/分鐘，室溫（18-25℃）輕輕混合20分鐘

11、加入100ul的終止液終止反應(yīng)

12、輕輕混合，確保顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色

13、使用微孔板閱讀器，在450nm處，5分鐘內(nèi)讀取吸光值

結(jié)果分析：

分別計(jì)算參考標(biāo)準(zhǔn)品和樣品在450nm處的平均吸光值
用平均吸光值和濃度值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y軸是吸光值，X軸是濃度
使用每個(gè)樣品的平均吸光值來(lái)確定抗-PEG IgM的濃度值
濃度值乘以稀釋因子來(lái)計(jì)算出血清或血漿樣品中抗-PEGIgM的實(shí)際濃度
以上步驟使用電腦繪圖軟件進(jìn)行繪制
如果樣品的吸光度值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，樣品需要重新稀釋和檢測(cè)

相關(guān)ELISA>試劑盒產(chǎn)品如下：

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品描述
小鼠抗-PEG IgM ELISA試劑盒	ADM0656A	用于檢測(cè)小鼠血清和血漿中抗-PEG IgM
大鼠抗-PEG IgM ELISA試劑盒	ADM0658A	用于檢測(cè)大鼠血清和血漿中抗-PEG IgM
猴抗-PEG IgM ELISA試劑盒	ADM0660A	用于檢測(cè)猴血清和血漿中抗-PEG IgM