免疫印跡(Western Blotting)技術服務

來源：Seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-03-09 14:02:00【大中小】

免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(western blot)，它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。

我們為您提供全套免疫印跡(western blot)技術服務和相關的試劑耗材。主要實驗步驟如下：

1. 蛋白質抽提

●實驗對象為組織樣品，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。
●實驗對象為細胞樣品（細胞培養），每份樣品取1×10⁶～1×10⁷細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白質定量：按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。

3. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。

4. 蛋白質轉移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4°C轉移過夜。

5. western blot膜的封閉和抗體孵育

A.膜在5％脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。
B.封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時，抗原抗體結合。
C.加入HRP標記的二抗體以結合一抗，室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。

6. western blot結果檢測：化學發光法檢測，膜與化學發光底物孵育，經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數字化。

7. western blot數據分析：目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。

8. 提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關數據。

western blot費用：每張膜上做一種目的蛋白和相應的內參蛋白。每張膜上可做8個樣品。每張膜的費用：1500.0元。一抗另計，其它試劑免費，一抗訂購時間約為3周。

時間：約2－3周。

Western Blotting相關的試劑和耗材

產　品　名　稱	包　裝	單　價(RMB)
Trypsin-EDTA(胰酶EDTA)	0.25%,100ml	150.00
蛋白裂解液（蛋白提取液）	10ml	60.00
PMSF	100mM 10ml	86.00
40% Acr/Bis (37.5:1)	100ml	100.00
40% Acr/Bis (29:1)	100ml	100.00
40% Acr/Bis (19:1)	100ml	100.00
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液	2x,1ml	28.00
SDS-PAGE電泳緩沖液	10x,500ml	100.00
蛋白膠快速染色液	100ml	120.00
蛋白轉移緩沖液	10x,500ml	100.00
可逆型轉移膜染色液	100ml	120.00
Tris-HCl Buffer,PH6.8(配濃縮膠）	0.5M, 250ml	100.00
Tris-HCl Buffer,PH8.8(配分離膠）	1.5M, 250ml	100.00
PBS buffer	20x,500ml	100.00
PBST buffer	20x,500ml	100.00
TBST buffer	20x,500ml	100.00
TBS buffer	20x,500ml	100.00
SDS	10%,100ml	100.00
洗脫抗體緩沖液(膜再生液）	100ml	100.00
二抗-HRP	0.2mg	175.00
預染Marker（20~120kDa）	250ul	200.00
ECL化學發光試劑	25ml	200.00
顯影液	250ml	45.00
定影液	250ml	45.00
硝酸纖維素膜NC膜	15cm*20cm	100.00
PVDF膜	13.5cm*15cm	100.00
3MM濾紙	27cm*1M	50.00
X線暗盒	5*7int.	600.00
柯達X光膠片	5*7int. 100/pk	200.00
乳膠手套	100/pk	65.00
PE薄膜手套	100/pk	5.00

原裝進口標簽蛋白單克隆抗體

標簽蛋白（Tag protein）是指利用DNA體外重組技術，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和純化等。隨著技術的不斷發展，研究人員相繼開發出了具有各種不同功能的蛋白標簽。目前，這些蛋白標簽已在基礎研究和商業化產品生產等方面得到了廣泛的應用。

標簽蛋白抗體(Tag-antibody)可用于檢測各種商品化表達載體上的標簽序列（如：DYKDDDDK, 6xHis, GFP, Myc，GST、HA等），籍以分析鑒定目的蛋白的表達含量及其功能。其原理是抗原—抗體反應，這些標簽抗體可以高度特異地結合對應的標簽融合蛋白，從而達到對相應的標簽融合表達對蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量的研究。

本產品特點；

● 高敏感度 ● 高親和力 ● 低背景 ●高性價比

標簽蛋白單克隆抗體 (DYKDDDDK=FLAG)

標簽	描述(克隆號)	包裝
標簽	描述(克隆號)	包裝
DYKDDDDK（FLAG）	Anti DYKDDDDK tag (1E6)	200ug;1mg;5mg
	Anti DYKDDDDK tag (1E6), HRP	100ul
	Anti DYKDDDDK tag (1E6), Antibody Beads	1ml; 5ml; 25ml
6xHis	Anti 6xHis (9F2) (C-terminal specific)	200ug
	Anti 6xHis (9F2), HRP (C-terminal specific)	100ul
	Anti 6xHis (9C11) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (9C11), HRP (N?C-terminal)	100ul
	Anti 6xHis (21-48) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (28-75) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (48-75), Antibody Beads	1ml; 5ml
GFP	Anti GFP (mFX73) (for IP and IHC)	100ul, 100ul*5
GFP	Anti GFP (mFX75) (for Western Blotting)	200ug
GST	Anti GST (5A7)	200ug
GST	Anti GST (5A7), HRP	100ul
c-Myc	Anti c-Myc (9E10)	200ug
	Anti c-Myc (9E10), HRP	100ul
	Anti c-Myc (9E10), Antibody Beads	1ml; 5ml
HA	Anti HA, mAb (4B2)	200ug
	Anti HA, mAb (4B2), HRP	100ug
	Anti HA (4B2) Antibody Beads	1ml; 5ml