蛋白表達純化技術外包服務
西寶生物蛋白分離純化平臺為您提供專業的蛋白表達純化外包服務,包括表達質粒構建及原核蛋白表達純化、哺乳動物細胞蛋白表達純化等,終產 品可用于免疫學、結構分析、擴大培養及其他多種實驗中。您還可以直接訂購從基因合成到蛋白表達純化的服務。
步驟1. 目標基因全基因合成:
1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因,免費提供給客戶。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化,密碼子優化。
3. 合成設計好的基因序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化,密碼子優化。
3. 合成設計好的基因序列。
提供給客戶:目標基因(在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。
價格:3.80元/堿基, 如果客戶直接提供構建好的質粒,則免去這部分費用.
時間:2-3周,根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務
價格:3.80元/堿基, 如果客戶直接提供構建好的質粒,則免去這部分費用.
時間:2-3周,根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務
步驟2. 目標基因亞克隆:
1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 免費提供如下表達載體:
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 免費提供如下表達載體:
Expression Vector
|
Promoter
|
Tag
|
pET3a, pET11a, pET24a
|
T7/ac
|
None or T7 Tag
|
pET32a
|
T7/ac
|
TRX & HIS
|
pET41a
|
T7/ac
|
GST & HIS
|
pET22b, pET25b, pET26b
|
T7/ac
|
Secret
|
pET28a, pET15b, pRSETb
|
T7/ac
|
HIS
|
pET50b, pET43a
|
T7/ac
|
Nus, HIS
|
pPEPTIDE
|
T7/ac
|
HIS
|
pMAL-c2x
|
T7/ac
|
MBP
|
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P
|
T7/ac
|
GST
|
pQE30
|
T5
|
HIS
|
pTrcHisB
|
Trc
|
T7, HIS
|
pTWIN
|
T7/ac
|
Intein, CBD
|
pBV220
|
PRPL
|
None
|
提供給客戶:正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
價格:免費
時間:1-2周
價格:免費
時間:1-2周
步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選:
1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
2. 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供給客戶:重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。
價格:免費
時間:1周
價格:免費
時間:1周
步驟4. 目標蛋白表達及純化:
1. 搖瓶培養1L重組細菌,誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽,再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點)。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
2. 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽,再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點)。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供給客戶:純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。
價格:
價格:
1. 如果目標蛋白含有親和標簽(His-tag or GST-tag)
5,000元(目標蛋白純度>80%,不切除標簽)
5,500元(目標蛋白純度>90%,不切除標簽)
6,000元(目標蛋白純度>80%,切除標簽)
6,500元(目標蛋白純度>90%,切除標簽)
5,000元(目標蛋白純度>80%,不切除標簽)
5,500元(目標蛋白純度>90%,不切除標簽)
6,000元(目標蛋白純度>80%,切除標簽)
6,500元(目標蛋白純度>90%,切除標簽)
2. 如果目標蛋白不含有親和標簽
8,000元(目標蛋白純度>80%)
9,000元(目標蛋白純度>90%)
8,000元(目標蛋白純度>80%)
9,000元(目標蛋白純度>90%)
3. 如果沒有獲得目標蛋白,則不收取任何費用(僅限客戶直接提供構建好的質粒時)。
時間:2~3周
備注: 1. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們最終根據實際情況將給客戶提供最少1mg,最多10mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。
2. 我們提供的最終產品一般為保存于常規的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。
3. 每次Western blot檢測最多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。詳見 Western Blot 檢測服務。
2. 我們提供的最終產品一般為保存于常規的緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中蛋白質溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。
3. 每次Western blot檢測最多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。詳見 Western Blot 檢測服務。
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