D-二聚體（D-Dimer）-磁微粒化學(xué)法學(xué)發(fā)光（AP/AE） /熒光免疫層析解決方案

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2024-04-08 08:53:00【大中小】

1.項(xiàng)目背景

1.1 D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子ⅩⅢ交聯(lián)后，經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，能夠反映體內(nèi)的凝血功能和纖溶活性，是機(jī)體高凝狀態(tài)、血栓形成、繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)的指標(biāo)。在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內(nèi)凝血、重癥肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓醫(yī)治后均可見(jiàn)D-二聚體水平升高，可作為溶栓醫(yī)治的有效觀(guān)察指標(biāo)。由于具有極高的敏感性和陰性預(yù)測(cè)值，臨床上已經(jīng)將D-二聚體陰性作為排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深靜脈血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依據(jù)。

1.2 目前D-二聚體檢測(cè)方法眾多，主要有酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）、酶聯(lián)免疫熒光（ELFA）、非增強(qiáng)膠乳凝集試驗(yàn)、膠乳增強(qiáng)免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法、免疫層析（POCT）等。這些方法在檢測(cè)方便性、檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)、檢測(cè)敏感性、結(jié)果報(bào)告（定性/半定量/定量）等方面各有不同。由于針對(duì) D-二聚體D-結(jié)構(gòu)域單克隆抗體的引入，使得檢測(cè)特異性和敏感性獲得了顯著的提高，但不同檢測(cè)方法間結(jié)果差異可達(dá)幾十倍，特別是檢測(cè)敏感性（陰性排除價(jià)值），大多數(shù)未獲得驗(yàn)證或權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可。

1.3 在2022年《急診胸痛心血管標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)專(zhuān)家共識(shí)》中，推薦意見(jiàn) 12 ：基于D-二聚體檢測(cè)缺乏國(guó)際認(rèn)證的內(nèi)部對(duì)照或校準(zhǔn)品，不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不具可比性，建議在動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)采用同一方法。【推薦級(jí)別：強(qiáng)推薦】

2.性能表現(xiàn)

針對(duì)D-二聚體的檢測(cè)，西寶生物推出2種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下。

2.1化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：

2.1.1組合1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記堿性磷酸酶；

線(xiàn)性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以?xún)?nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

2.1.2組合2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記堿性磷酸酶；

線(xiàn)性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以?xún)?nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

2.2化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：

2.2.1組合3：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記吖啶酯；

線(xiàn)性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以?xún)?nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

2.2.2組合4：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記吖啶酯；

線(xiàn)性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以?xún)?nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

2.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺(tái)：

組合5：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記熒光微球+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）劃膜；

線(xiàn)性范圍：0.1mg/L-15mg/L。

濃度值在660 mg/L以?xún)?nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

3. 臨床相關(guān)性

3.1 化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：

3.1.1 組合1

西寶DD抗體配對(duì)組合1（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對(duì)組合1（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2＞0.95。

3.1.2 組合2

西寶DD抗體配對(duì)組合2（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2在0.94左右;

西寶DD抗體配對(duì)組合2（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2大于0.95。

3.2化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：

3.2.1 組合3

西寶DD抗體配對(duì)組合3（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2＞0.95;

西寶DD抗體配對(duì)組合3（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2＞0.95。

3.2.2 組合4

西寶DD抗體配對(duì)組合4（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對(duì)組合4（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2＞0.95。

3.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺(tái)：

西寶DD抗體配對(duì)組合5（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對(duì)組合5（＜15mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關(guān)性R2＞0.95。

4. 測(cè)試方案

4.1化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：

4.1.1 組合1

待測(cè)抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號(hào)：EKN0230D）,樣本/標(biāo)準(zhǔn)品（需要預(yù)稀釋?zhuān)?加樣量20ul；

試劑1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步： 20ul預(yù)稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，進(jìn)行測(cè)試。

4.1.2 組合2

待測(cè)抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號(hào)：EKN0230D）,樣本/標(biāo)準(zhǔn)品（需要預(yù)稀釋?zhuān)?加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步： 20ul預(yù)稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器: 迎凱Shine i2900。

4.2化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：

4.2.1 組合3

待測(cè)抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號(hào)：EKN0230D）,樣本/標(biāo)準(zhǔn)品（需要預(yù)稀釋?zhuān)?加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步： 20ul預(yù)稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

4.2.2 組合4

待測(cè)抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號(hào)：EKN0230D）,樣本/標(biāo)準(zhǔn)品（需要預(yù)稀釋?zhuān)?加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步： 20ul預(yù)稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器: 科斯邁SMART 500S。

4.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺(tái) 組合5：

待測(cè)抗原：D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號(hào)：EKN0230D）,樣本/標(biāo)準(zhǔn)品:加樣量5ul；

反應(yīng)條件： 樣本+熒光液混勻，上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；

測(cè)試使用熒光儀器: 和邁FIC-S100；

5.產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)	推薦配對(duì)
D-二聚體（D-Dimer）抗體	EKY0088M	D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記堿性磷酸酶（發(fā)光配對(duì)組合1） D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記堿性磷酸酶（發(fā)光配對(duì)組合2） D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合3） D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088M）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合4） D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記熒光微球+D-二聚體抗體（貨號(hào)：EKY0088M）劃膜（熒光配對(duì)組合）
D-二聚體（D-Dimer）抗體	EKY0088N
D-二聚體（D-Dimer）抗原（天然）	EKN0230D	校準(zhǔn)、質(zhì)控
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088M）-羧基磁珠濃縮液	DKY1330A
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088N）-羧基磁珠濃縮液	DKY1330B
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088M）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1330C
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088N）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1330D
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088M）-吖啶酯濃縮液	DKY1330E
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088N）-吖啶酯濃縮液	DKY1330F
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號(hào)：EKY0088N）標(biāo)記熒光微球濃縮液	DKY1330G
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型）	DCD0517B-
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
時(shí)間分辨熒光微球，羧基（200nm）	AEG0786B