D-二聚體（D-Dimer）-磁微粒化學法學發光（AP/AE） /熒光免疫層析解決方案

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-04-08 08:53:00【大中小】

1.項目背景

1.1 D-二聚體是纖維蛋白單體經活化因子ⅩⅢ交聯后，經纖溶酶水解所產生的一種特異性降解產物，能夠反映體內的凝血功能和纖溶活性，是機體高凝狀態、血栓形成、繼發性纖溶亢進的指標。在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內凝血、重癥肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓醫治后均可見D-二聚體水平升高，可作為溶栓醫治的有效觀察指標。由于具有極高的敏感性和陰性預測值，臨床上已經將D-二聚體陰性作為排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深靜脈血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依據。

1.2 目前D-二聚體檢測方法眾多，主要有酶聯免疫吸附（ELISA）、酶聯免疫熒光（ELFA）、非增強膠乳凝集試驗、膠乳增強免疫比濁法、化學發光法、免疫層析（POCT）等。這些方法在檢測方便性、檢測時長、檢測敏感性、結果報告（定性/半定量/定量）等方面各有不同。由于針對 D-二聚體D-結構域單克隆抗體的引入，使得檢測特異性和敏感性獲得了顯著的提高，但不同檢測方法間結果差異可達幾十倍，特別是檢測敏感性（陰性排除價值），大多數未獲得驗證或權威機構認可。

1.3 在2022年《急診胸痛心血管標志物聯合檢測專家共識》中，推薦意見 12 ：基于D-二聚體檢測缺乏國際認證的內部對照或校準品，不同實驗室結果不具可比性，建議在動態監測時采用同一方法。【推薦級別：強推薦】

2.性能表現

針對D-二聚體的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下。

2.1化學發光（AP）平臺：

2.1.1組合1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶；

線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.1.2組合2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶；

線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.2化學發光（AE）平臺：

2.2.1組合3：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯；

線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.2.2組合4：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯；

線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；

濃度值在1660 mg/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：

組合5：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）劃膜；

線性范圍：0.1mg/L-15mg/L。

濃度值在660 mg/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

3. 臨床相關性

3.1 化學發光（AP）平臺：

3.1.1 組合1

西寶DD抗體配對組合1（＜4mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對組合1（＜40mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。

3.1.2 組合2

西寶DD抗體配對組合2（＜4mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.94左右;

西寶DD抗體配對組合2（＜40mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2大于0.95。

3.2化學發光（AE）平臺：

3.2.1 組合3

西寶DD抗體配對組合3（＜4mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95;

西寶DD抗體配對組合3（＜40mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。

3.2.2 組合4

西寶DD抗體配對組合4（＜4mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對組合4（＜40mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。

3.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：

西寶DD抗體配對組合5（＜4mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;

西寶DD抗體配對組合5（＜15mg/L）的發光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。

4. 測試方案

4.1化學發光（AP）平臺：

4.1.1 組合1

待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；

試劑1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，進行測試。

4.1.2 組合2

待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器: 迎凱Shine i2900。

4.2化學發光（AE）平臺：

4.2.1 組合3

待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入預激發液及激發液，進行測試。

4.2.2 組合4

待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；

試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器: 科斯邁SMART 500S。

4.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺組合5：

待測抗原：D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品:加樣量5ul；

反應條件： 樣本+熒光液混勻，上樣，反應時間（10min-15min）；

測試使用熒光儀器: 和邁FIC-S100；

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
D-二聚體（D-Dimer）抗體	EKY0088M	D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶（發光配對組合1） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯（發光配對組合3） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯（發光配對組合4） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）劃膜（熒光配對組合）
D-二聚體（D-Dimer）抗體	EKY0088N
D-二聚體（D-Dimer）抗原（天然）	EKN0230D	校準、質控
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-羧基磁珠濃縮液	DKY1330A
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-羧基磁珠濃縮液	DKY1330B
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1330C
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1330D
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-吖啶酯濃縮液	DKY1330E
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-吖啶酯濃縮液	DKY1330F
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球濃縮液	DKY1330G
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517B-
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）	AEG0786B