血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）- 磁微?；瘜W發光法

來源：作者：人氣：-發表時間：2025-05-12 16:08:00【大中小】

1. 項目背景

凝血酶的生成是凝血途徑的核心，它催化纖維蛋白原轉化為纖維蛋白形成血栓。由于它在體內的半衰期極短，只有幾秒鐘，因此測定困難。血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）在纖維蛋白聚合物形成過程中產生，是凝血酶生成后與抗凝血酶1:1結合形成的復合物，在血漿的半衰期約3-15分鐘，可間接反映凝血酶的生成量，是凝血系統啟動的標志，可直接、靈敏地反映凝血系統的活化程度，并進一步早期預測血栓的形成和再栓的復發。同時，TAT也是抗凝治療的敏感指標，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢進，機體處于高凝狀態。

日本血栓止血學會的學術標準化委員會《纖溶優勢型DIC的病態診斷指南（2006年）》中，將“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作為診斷必要條件。即使是血小板計數＜120×10⁹μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性減少），如TAT＜7ng/mL，提示發生DIC風險較低。TAT對于感染性疾病患者的DIC趨勢預測，是一種陰性預測值較高的標志物。下圖是TAT的作用機制。

2. 性能表現

針對血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）的檢測，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）

2.1化學發光（AE）平臺

組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記吖啶酯；

線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。

2.2化學發光（AP）平臺

組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶（DCE0108L）；

線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。

2.3 穩定性評估

2.3.1 磁珠包被抗體穩定性

采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成磁珠工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示：

TAT磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±10%以內（不含S0），表明TAT磁珠工作液熱穩定性良好。

表1 TAT磁珠工作液穩定性7天數據

序號	TAT抗原稀釋濃度ng/mL	TAT 磁珠工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異
S0	0	-0.2%
S1	2	-5.4%
S2	6.91	-5.4%
S3	16.88	-10.7%
S4	40.73	-5.2%
S5	70.95	-7.6%
平均變化（不含S0）		-6.9%

2.3.2 堿性磷酸酶標記抗體及磁珠包被抗體穩定性

采用堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（貨號：DCD0533A）+5%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成堿性磷酸酶工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表2所示：

堿性磷酸酶工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±5%以內（不含S0），表明TAT堿性磷酸酶工作液熱穩定性良好。

表2 TAT堿性磷酸酶工作液穩定性7天數據

序號	TAT抗原稀釋濃度ng/mL	TAT 堿性磷酸酶工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異
S0	0	-1.4%
S1	2	-0.9%
S2	6.91	3.2%
S3	16.88	9.3%
S4	40.73	1.7%
S5	70.95	3.3%
平均變化（不含S0）		3.3%

3. 臨床相關性

3.1化學發光（AE）平臺

西寶TAT抗體配對組合1（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R²在0.94左右。

西寶TAT抗體配對組合1（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R²在0.95左右。

3.2化學發光（AP）平臺

西寶TAT抗體配對組合2（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R²在0.88左右。

西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R²在0.95左右。

西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與廣州萬孚 TAT發光試劑賦值臨床相關性R²＞0.95。

4. 測試方案

4.1化學發光（AE）平臺抗體配對組合1

樣本/校準品:加樣量20ul；

試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2化學發光（AP）平臺抗體配對組合2

待測抗原：凝血酶-抗凝血酶復合物抗原（貨號：EDD0797B）

樣本/校準品:加樣量10ul；

試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體	EKY0964B	凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965B）標記吖啶酯（發光配對組合1）
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體	EKY0965B
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體	EKY0964C	凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體3（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體4（貨號：EKY0965C）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2）
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體	EKY0965C
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）-羧基磁珠濃縮液	DKY1327A
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965B）-吖啶酯濃縮液	DKY1327B
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）-羧基磁珠濃縮液	DKY1327C
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965C）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1327D
凝血酶-抗凝血酶復合物抗原	EDD0797B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517B
蛋白保護劑GH	DCL0009A	推薦使用濃度5%左右
重組堿性磷酸酶（高活性）	DCE0108L
磁珠標記物稀釋液（化學發光）	DCD0532A	/
堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（化學發光）	DCD0533A	/