Cisbio-HTRF篩選技術——高通量藥物篩選必備神器

來源：作者：人氣：-發表時間：2019-06-25 12:55:00【大中小】

Cisbio成立于1974年，總部位于法國Codolet，專為生命科學和診斷市場開發、生產和銷售高質量試劑和試劑盒。與市場上現有的傳統分析方法相比，Cisbio所開發的方法能夠為使用者提供更靈敏的定量免疫分析。其中包括各種經過驗證的藥物發現篩選試劑和高通量分析試劑盒，以及僅用于體外診斷試劑盒。

具體而言，Cisbio的HTRF® 篩選技術（均相時間分辨熒光技術）是快捷方便的檢測方法。西寶生物課提供Cisbio HTRF®相關檢測試劑盒，貨期穩定！產品線齊全！咨詢訂購熱線：400-021-8158！

HTRF 原理

HTRF技術基于時間分辨熒光（TRF）和熒光共振能量轉移（FRET）兩大技術原理

時間分辨熒光（TRF）

TRF利用稀土元素中鑭系元素的獨特性質,與普通熒光的主要區別是熒光的持續時間不同。普通熒光的半衰期為納秒級，鑭系元素的半衰期是毫秒級，有6個數量級的差別。所以，在檢測時，TRF有一個時間延遲---50微秒。經過這個時間延遲，普通熒光的信號幾乎為零。所以，TRF的背景低，反映樣品的實際情況。

熒光共振能量轉移（FRET）

FRET技術利用了兩種熒光基團的能量轉移，這兩種熒光基團分別稱為能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）。Donor 被外來光源激發（例如氙燈或激光），如果它與Acceptor 比較接近，可以將能量共振轉移到Acceptor上，使其受到激發，發出特定波長的發射光。將 Donor 和 Acceptor分別與相互作用的兩個生物分子結合，生物分子的結合可以將 Donor 和 Acceptor 拉到足夠近的距離，產生能量轉移。由于Acceptor的發射光來自于能量轉移，所以在實驗中不需要將未結合與已結合的分子分開，即不需要洗滌步驟。

HTRF 的優勢：

HTRF 是不需要洗滌的ELISA。其優勢如下：
· 操作簡單：空板直接加樣，加完即可檢測，時間短（加樣和孵育2h）
· 體系穩定：7天內可隨時檢測，信號基本不變
· 適合珍貴樣本：整個實驗體系只需20ul
· 均相檢測體系：無需包被，免洗ELISA，省時省力
· 數據客觀真實：比值處理可有效去除背景熒光，假陽性率和假陰性率低
· 反映樣品的實際情況，假陽性假陰性率低，可去除由于天熱產物自發熒光引起的背景

HTRF 的能量供體

HTRF的能量供體是銪（Eu）和鋱（Tb）的穴狀化合物。

在這個穴狀化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一個籠子里，結構穩定。

這個結構是由J. M. Lehn's教授發明的，并由此在1987年獲得了諾貝爾獎。

穴位化合物結構圖

HTRF 的能量受體

HTRF的能量受體也有兩種，XL665和d2。它們的光學性質相同，分子量不同。前者分子量為105 KD，實際上就是別藻藍蛋白（APC）。我們將APC的亞基偶聯在一起，使其不能解離，提高了穩定性。后者分子量為1KD，在某些實驗中有獨特的優勢。

HTRF 的操作步驟：

HTRF的操作步驟簡單，只需要將實驗所需試劑加進去，然后孵育、檢測即可，如下圖所示。

HTRF 檢測儀器多樣化：

Cisbio與幾乎所有的儀器供應商都建立了合作伙伴關系，下面是經過驗證的儀器列表。所有這些儀器都標有HTRF®的標志。

HTRF 的應用領域：

應用產品列表：

訂購咨詢熱線：400-021-8158

	試劑盒	應用
激酶(Kinase)	STK	1、絲氨酸、蘇氨酸激酶活性檢測 2、抑制劑或激動劑的篩選
	TK	1、酪氨酸激酶活性檢測 2、抑制劑或激動劑的篩選
	ADP Transcreener	激酶、ATP酶活性檢測，以及反應中生成ADP的定量
G蛋白偶聯受體 (GPCR)	cAMP	1、Gs，Gi類受體激動劑和拮抗劑的篩選 2、PDE酶活性的檢測 3、腺苷酸環化酶活性檢測 4、受體活性檢測
	IP-One	1、Gq類受體活性檢測 2、受體激動劑和拮抗劑，別構調節劑以及反向激動劑篩選 3、緩慢激動劑的檢測
	IP-One Elisa	針對科研用戶推出的傳統的Elisa方法 1、PLC相關受體的活性檢測 2、驗證GPCR功能
	Tag-lite	1、替代同位素做受體配體結合試驗2、受體的二聚化試驗 2、受體的二聚化實驗
磷酸化蛋白	pERK	1、AKT/MAPK通路研究 2、細胞表面受體研究
磷酸化蛋白	pAKT	1、AKT/MAPK通路研究 2、細胞表面受體研究
生物標記物 (Kinase)	Amyloid beta1-40	1、Amyloid beta1-40 peptide定量 2、分泌酶活性檢測
	Apo A1	1、載脂蛋白A1定量 2、核受體活性檢測
	Apo B	1、載脂蛋白B定量 2、核受體活性檢測
	cGMP	1、cGMP定量 2、PDE酶活性檢測 3、鳥苷酸環化酶活性檢測 4、受體活性檢測
	Cortisol	1、Cortisol定量 2、11β-HSD1活性檢測
	Estradiol	l、Estradiol定量 2、17β-HSD1活性檢測
	Histamine	Histamine定量
	Insulin	Insulin定量
	PEG2	PGE2定量
	Sirt1	Sirt1酶活性檢測
抗體定量	Total IgG	1、IgG定量 2、帶Fc標簽蛋白定量 3、人源化抗體篩選 4、抗體生產時的質控
	Kappa Mab	1、含Kappa輕鏈抗體的定量 2、抗體生產時的質控
	Lamda Mab	1、含Lamda輕鏈抗體的定量 2、抗體生產時的質控