蛋白質生產培養工序中氨基酸的監測

來源：作者：人氣：-發表時間：2016-01-20 14:31:00【大中小】

在蛋白質生產培養的工序中，培養液中的氨基酸是重要的營養源，對在不同溶氧量、PH值、溫度下培養液中的各種氨基酸濃度進行監測和控制至關重要。日立氨基酸分析儀(Hitachi)能夠進行多成分同步分析的定量精度氨基酸，以其高分離度而著稱，在國內應用較為普遍。西寶生物提供全自動氨基酸分析儀相配套的耗材、緩沖液和顯色劑等相關試劑，歡迎致電400-021-8158。

■ 生物藥品的研發流程

(※)實施培養液氨基酸監測的工序

■ 氨基酸監測的樣品和色譜條件

＜生理體液分析法色譜條件＞

L-8900全自動氨基酸分析儀

色譜柱	855-4506 4.6mmI.D.×60mm	柱溫	32～70℃
保護柱	855-3643 4.0mmI.D.×5mm	反應液流速	0.3mL/min
脫氨柱	855-3523 4.6mmI.D.×40mm	反應溫度	135℃
流動相	605-07471 PF Buffer Kit	檢測波長	VIS 570nm、440nm
反應液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	進樣量	20μL
反應液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	流速	0.35mL/min

＜樣品＞

＜預處理＞


細胞	CHO細胞(CRL-9606)
培養槽	1L
通風	僅液面通風(Air、O2、N2、CO2的混合氣體)
培養基	Ham's F12 + 10% FBS

培養液與濃度5%的三氯乙酸溶液以1:1混合
↓
離心分離	10,000rpm,10min
↓
過濾	Pore Size 0.2μm
↓
分析用樣品

在以下條件的培養過程中，定時采樣，進行了分析。

	培養不足1日	培養1日后
培養條件A	標準溶氧濃度	標準溶氧濃度
培養條件B	標準溶氧濃度	低溶氧濃度

■ 培養液中的氨基酸測定例

基于生理體液分析法的氨基酸標準樣品測定例(2nmol/20μL)

(但部分氨基酸為1nmol/20μL～40nmol/20μL)

培養液中的氨基酸測定例

■ 不同培養條件下氨基酸隨時間的變化

* 標準樣品的測定中，此次介紹的氨基酸中，Thr、Gly、Ala的峰保留時間的重現性為RSD=0.05～0.07%，峰面積的重現性為RSD=0.15～0.19%，得以確認茚三酮柱后衍生法的高度重現性。(均為n=3)(產品規格如下。峰保留時間的重現性：0.5%以內(Ala)、0.3%以內(Arg)；峰面積的重現性：1.5%以內(Gly、His)

* 通過監測培養液中各種氨基酸的濃度，可獲知培養過程中各成分的盈缺，因此有助于探討最佳培養液組成。另外，基于培養條件的不同，可見氨基酸含量的變化出現差異的成分。可以認為這反映出細胞內的處理過程已發生變化，產生的蛋白質也可能不同，因此培養液中氨基酸的同步監測可作為抗體藥物生產領域中生產管理的有效指標之一。

注意：本資料所示數據僅為測定例用數據而非可保證儀器性能的數據。儀器只是研究用儀器，而不是診斷、治療或預防人或動物疾病的醫療儀器。

■ 參考文章

1.日立氨基酸分析儀配套試劑解決方案

2.我國食品行業氨基酸的測定方法簡介