唾液酸分析

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-08 15:42:00【大中小】

NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神經氨酸）的定量分析是監管機構在生物制藥表征的產品標準規格指南中提出
的一個要求。特別是：人類和非人類的唾液酸 (NeuAc/NANA和NeuGc/NGNA分別)相對水平測定是很重要的，因為有些病人有高水平的抗神經氨酸（anti-NeuGc）抗體，這可導致中和反應和快速清除含有神經氨（NeuGc）的生物藥品(Nguyen等，2005)。

唾液酸（NeuAc）和神經氨酸（NeuGc）在分析糖蛋白中具有重要意義，它通常被認為是生物治病藥物的關鍵質量屬性(CQA)。
較廣泛的唾液酸（NeuAc）和神經氨酸（NeuGc）比例確定方法是如下：

通過輕度酸水解放糖蛋白上的唾液酸殘基。
用1-1,2-二氨基-4,5-亞甲基苯酚（DMB）熒光標記釋放的唾液酸。
通過高效液相色譜法（HPLC）或超高效液相色譜法（UHPLC）對DMB標記的唾液酸進行相對定量分析。

西寶生物提供Ludger的DMB標記試劑盒（貨號：LT-KDMB-A1），提供從糖蛋白釋放唾液酸并用DMB標記的所有功能。該試劑盒包含可以檢測高達22個糖蛋白樣品（每樣品含50-100μg糖蛋白）的試劑和材料。每個標記可標記每個樣品中大約10pmol到2.5nmol的唾液酸。產品詳情請咨詢：400-021-8158！

試劑盒中包含一系列唾液酸的參考標準品（含Neu5Ac，Neu5Gc，Neu5，7Ac2，Neu5，Gc9Ac，Neu5，9Ac2，Neu 5,7,（8），9Ac3Gc），以及NeuAc和NeuGc的定量標準品。這三個標準品可以隨著釋放的唾液酸樣品進行DMB標記。

系列稀釋液制備后的NeuAc和NeuGc定量標準品可用于定量分析。LudgerTag™DMB試劑盒中有提供關于如何制備的說明，如有需要NeuAc和NeuGc定量標準品也可在另行購買，請跟我們聯系。

作為陽性對照，我們建議使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白，我們同樣建議使用純化的Ludger BioQuant^TM糖肽標準品來作為陽性對照。這個糖肽標準品（貨號: BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個復雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個N-乙酰神經氨酸。

使用此標準品可以檢查聚糖釋放、標記和回收的有效性，并可增強您的唾液酸測量準確性。Ludger還提供可用于識別Neu5，9Ac2的標準品。水可以作陰性對照。

圖1：由LS-UR2 UHPLC色譜柱（貨號LS-UR2-2.1x100）分析出來的DMB-標記唾液酸對照品。

為了檢測聚糖的分離該對照品也可以作為跑樣之前的系統適用性標準品。

唾液酸分析相關產品

商品型號	英文品名	中文品名	包裝
LT-KDMB-A1	DMB Sialic Acid Labeling Kit	DMB唾液酸釋放試劑盒	1Reaction Set
LS-R1-4.6x150	Ludger Sep R1 HPLC Column	R1 HPLC 色譜柱-唾液酸	4.6 x150 mm
LS-UR2-2.1x100	Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids	UR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸	2.1 x 100 mm
CM-NEU-AC-01	N-acetylneuraminic acid quantitative standard	N-乙酰神經氨酸定量標準品	1 nmol
CM-NEU-GC-01	N-glycolyneuraminic acid quantitative standard	N-羥乙酰神經氨酸定量標準品	1 nmol
CM-NEU5,9,AC-01	N-acetylneuraminic acid qualitative standard	N-乙酰神經氨酸定性標準品	1 nmol
BQ-GPEP-A2G2S2	A2G2S2 glycopeptide standard	A2G2S2 糖肽標準品（用于唾液酸釋放和標記過程）	10 μg
GCP-FET-50U-X4	Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug)	胎球糖蛋白（4×50微克）（唾液酸化陽性對照）	4 x 50 μg

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