蛋白酶K / Proteinase K

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-03-23 13:55:00【大中小】

蛋白酶K / Proteinase K

(Lyophilized Powder, from Tritirachium album limber)

簡介
蛋白酶K是現有蛋白酶中活性高的品種，來源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）。蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。在pH 4～pH 12的條件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩定。它可切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質的降解。蛋白酶K在尿素和SDS中穩定，具有降解天然蛋白質的能力。

應用
u 基因診斷試劑盒
u 基因組DNA提取試劑盒
u RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶
u 提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質的雜質-譬如DNA疫苗和肝素的制備
u 制備脈沖電泳的染色體DNA
u 蛋白質印跡
u 蛋白酶K的一般工作濃度50-100ug/ml

質量指標

貨號	170290
品名	蛋白酶K / Proteinase K
來源	林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
外觀	白色凍干粉
比活	>40 U/mg蛋白。
分子量	29,730
CAS No.	39450-01-6
EC No	3.4.21.14
活性單位定義	37oC、pH 7.5條件下，每分鐘可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量，定義為一個單位（U）。
DNase殘留	以λ DNA為底物，37oC消化6小時以上，未檢測到脫氧核糖核酸酶活性。
RNase殘留	25oC消化16小時以上，未檢測到核糖核酸酶活性。
失活方法	反應體系中加入PMSF或DFP抑制劑即可失活，65℃溫育10-15min可部分失活
包裝/價格	100mg/350元，1g，10g，詢價現貨

儲存

干粉狀態可在0~4oC條件下低溫保藏。溶解后分裝為適當體積，-20oC貯存。運輸可在室溫下進行。
正確的貯存條件下，干粉狀態的有效期可達一年。液體狀態在-20oC有效期為半年。打開包裝使用后，如果在2~8oC環境下放置超過一周時間，建議過濾除菌或增加穩定劑如0.5%疊氮化鈉，防止微生物污染。

貯存和稀釋緩沖液：50 mM Tris-HCL緩沖液,2mMCaCL2 (pH 8.0)。

反應條件：反應緩沖液中37-56℃溫育一小時

實驗數據

1. 酶活測定和穩定性試驗

(1) 酶活測定

Specificity Activit of Proteinase K
Product Manufacture	國外M品牌	Seebio
Activty from lyophilized product u/mg	33.5	49.5

(2)純度和消化蛋白測試（SDS-PAGE）

結果: 蛋白質純度超過 99% （激光掃描 SDS-PAGE膠）

(3) 穩定性測試：

結論：凍干粉正確儲存一年內活性不變；液體酶酶活半年內降低小于5%。

2. 對比試驗

以Roche蛋白酶K和seebio蛋白酶K對比。
對比反應條件：roche蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶K55℃60m
以下結果QC符合要求。每管均為500ul全血。共3組對照。

實驗條件	得率
ROCHE65℃10m	33ug	19.2ug	5ug
SEEBIO65℃10m	30ug	20ug	4.8ug
SEEBIO55℃60m	30.4ug	18.5ug	5.4ug

結論：SEEBIO 蛋白酶K與ROCHE蛋白酶k實驗結果顯示在65℃水浴10m后得率及跑膠圖效果基本相同。可替代使用。

全血提取DNA試劑盒電泳圖

日期：2010.06.09
凝膠濃度：0.7％瓊脂糖RNA膠
上樣量：1ug/孔
電泳條件：U=105V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）

全血提取DNA actin電泳圖

日期：2010.06.10
凝膠濃度：0.7％瓊脂糖DNA膠
上樣量：10ug/孔
電泳條件：U=95V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）
－：Negative control
＋：Positive Control

參考文獻

1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.