抗體親和層析-高純度重組蛋白A（Seebio(R) rProtein A）

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-09-28 09:17:00【大中小】

單克隆抗體在目前仍是廣泛使用的生物藥物。Protein A 填料具有高親和性、可操作性、可放大性以及法規(guī)記錄，因此幾乎所有商業(yè)批準(zhǔn)的 mAb 制造工藝均使用 Protein A 填料捕獲作為下游純化的初始步驟。Seebio為更好地適應(yīng)客戶的需求，對蛋白 A 填料產(chǎn)品不斷升級改造，推陳出新。

蛋白A（Protein A）

蛋白A (Staphylococcus Protein A，簡稱SPA)是金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的一種膜蛋白，具有與抗體特異性結(jié)合的能力，蛋白A親和層析柱已成為應(yīng)用廣泛的純化抗體的親和柱，可從腹水、血清和細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。

天然蛋白A結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不耐酸堿，分子內(nèi)部不存在二硫鍵，擁有5個高度同源的區(qū)域，與IgG有結(jié)合作用。蛋白A與多種來源的IgG都有很強的親和力，結(jié)合位點位于IgG的Fc段，不影響IgG結(jié)合抗原的活性。目前，以蛋白A為親和配基的親和層析介質(zhì)已廣泛應(yīng)用于單克隆抗體和Fc重組融合蛋白的純化。

圖1：金黃色葡萄球菌 Protein A

Protein A 填料作為抗體純化的核心步驟，在純化過程中需要進(jìn)行在位清洗 (clean-in-place, CIP)以達(dá)到重復(fù)利用的目的，節(jié)省高昂的層析介質(zhì)成本。氫氧化鈉 (0.1-0.5 M)溶液是有效的清潔劑，但天然 Protein A 受其序列限制不能耐受高濃度的堿液清洗。往往導(dǎo)致蛋白A的變性和脫落。

西寶生物成通過基因重組改造，去除了天然ProteinA中的IgG非結(jié)合區(qū)，僅由Fc結(jié)合區(qū)組成，同時經(jīng)突變改造，并引入了抗蛋白酶的鏈接子降低空間位阻，使rProteinA有了更高的動態(tài)結(jié)合容量，顯著提高了耐酸堿處理能力。經(jīng)層析純化獲得。純化過程不使用抗體柱親和層析，避免產(chǎn)品中摻入無關(guān)IgG。

Seebio® 重組蛋白A（rProtein A）簡介

產(chǎn)品名稱	Seebio® 重組蛋白A（rProtein A）
英文名稱	Recombinant Protein A
貨號	ECL0019H
Purity（SDS-PAGE）	≥95%
來源	E.coli
分子量	28.2kDa
外觀	凍干粉末
標(biāo)簽	His標(biāo)簽

Seebio®重組蛋白A特性與用途

Seebio重組蛋白A的C末端含有半胱氨酸，可定向偶聯(lián)到固體分離介質(zhì)上，用于單克隆抗體或多克隆抗體的純化。可結(jié)合大多數(shù)人或小鼠免疫球蛋白子類(如人IgG1、IgG2、IgG4；小鼠IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG3)，還可結(jié)合牛、倉鼠、兔的總免疫球蛋白。

Seebio重組蛋白A可與多種報告分子(熒光染料、酶標(biāo)記、生物素、膠體金、放射性標(biāo)記等)偶聯(lián)而不影響其與抗體結(jié)合的活性。這些偶聯(lián)后的蛋白A衍生物可用于Western blot、ELISA、免疫組化等的抗體檢測。

Seebio®重組蛋白A優(yōu)勢

非抗體柱純化，產(chǎn)品中無其它抗體如IgG等的污染。
可耐受0.5 M NaOH和0.5M HCl 處理，不降解，抗體結(jié)合能力不變
高PH洗脫，降低IgG聚集。
產(chǎn)品有特為抗體純化柱設(shè)計的連接基團(tuán)，可直接用于蛋白A柱的制備。
質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。
純度高：宿主蛋白殘留小。
凍干粉：易于儲存和運輸；
符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程遵循 ISO 9001質(zhì)量體系。

Seebio®重組蛋白A產(chǎn)品說明

穩(wěn)定性：重組蛋白A凍干粉存儲于2-8℃，24個月穩(wěn)定；偶聯(lián)時用PBS (pH7.4)溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用；用水溶解后，-20℃以下保存。

儲存：2-8℃ 儲存，不可凍存。

產(chǎn)品列表

貨號	中文名稱	包裝規(guī)格
ECL0019H	Seebio® 重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用	10mg
		100mg
		1g
		1kg

附表：Protein A、Protein G、Protein L結(jié)合抗體能力比較

物種	亞類	Protein A	Protein G	ProteinL
人	IgG	+++	+++	+++
	IgG1	++++	++++	++++
	IgG2	++++	++++	++++
	IgG3	-	+++	+++
	IgG4	++++	++++	++++
	IgM	+	-	+++
小鼠	IgG	++	++	+++
	IgGl	+	++++	+++
	IgG2a	++++	++++	+++
	IgG2b	+++	+++	+++
	IgG3	++	+++	+++
	IgM	-	-	+++
兔	IgG	+++	+++	+
山羊	IgG	+	++	-
	IgG1	+	+++	-
	IgG2	+++	+++	-
綿羊	IgG	+	++	-
	IgGl	+	++	-
	IgG2	+++	+++	-
大鼠	IgG	+	++	+++
	IgGl	-	+	+++
	IgG2a	-	++++	+++
	IgG2b	-	++	+++
	IgG2c	++	++	+++
	IgG3	+	++	N/A
狗		++	+	N/A
豬		+++	++	+++
Kappa鏈抗體		-	-	+++