α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒食品分析用（297-78601）

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2020-06-19 13:28:00【大中小】

Wako開(kāi)發(fā)了含有α-葡萄糖苷酶可保證酶活性的"α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒"（以下均稱(chēng)為"試劑盒"）。與"LabAssay™葡萄糖檢測(cè)試劑盒"配套使用（需單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)），可用于檢測(cè)食品對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。試劑盒中的α-葡萄糖苷酶以二糖（蔗糖和麥芽糖）作為反應(yīng)底物，可保證酶的降解活性，因此被認(rèn)為可用于測(cè)定α-葡糖苷酶活性（IC50）的抑制劑作用。試劑盒的研發(fā)及特點(diǎn)說(shuō)明如下。西寶生物作為WAKO授權(quán)的一級(jí)代理，品質(zhì)保證，貨期穩(wěn)定，詳情致電400-021-8158

研發(fā)背景

近年來(lái)，日漸豐富的膳食致使肉食品攝入量增加、膳食不均衡和營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，導(dǎo)致了糖尿病、肥胖和血脂異常等生活方式病。此外代謝綜合征的發(fā)展也日益嚴(yán)峻。

糖尿病患者數(shù)量呈上升趨勢(shì)尤為明顯。根據(jù)日本2012年的國(guó)家健康和營(yíng)養(yǎng)調(diào)查推算，約有950萬(wàn)人嚴(yán)重懷疑患有糖尿病，大約1,100萬(wàn)人有患糖尿病可能性（糖尿病潛在人群）。

糖尿病臨床使用的藥物之一就是α-葡糖苷酶抑制劑。淀粉被淀粉酶分解生成麥芽糖等二糖，α-葡萄糖苷酶可分解這些二糖生成葡萄糖，從而升高血液的血糖值。因此，通過(guò)抑制α-葡萄糖苷酶可減少葡萄糖生成量，從而抑制血糖升高。目前，研究者們正致力于從各種各樣的植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制物質(zhì)，并將其應(yīng)用于抑制血糖值上升的食品中。

目前為止，有若干關(guān)于計(jì)算α-葡糖苷酶抑制劑的IC50值步驟的報(bào)告，但是卻沒(méi)有檢測(cè)試劑盒類(lèi)商品市售。此外，檢測(cè)哺乳動(dòng)物小腸來(lái)源的α-葡糖苷酶產(chǎn)品很少，其中一部分產(chǎn)品甚至不能保證酶活性。

因此，定量檢測(cè)α-葡萄苷酶活性的抑制作用，且具有良好重復(fù)性，是有一定難度的。隨著研究人員對(duì)用于定量檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用試劑需求的增加，在此背景下，Wako開(kāi)發(fā)了本試劑盒。

研發(fā)過(guò)程

在介紹"試劑盒"的開(kāi)發(fā)過(guò)程之前，先說(shuō)明一下"LabAssay™ 葡萄糖檢測(cè)試劑盒"的IC50值檢測(cè)和計(jì)算原理（圖1）。

LabAssay™ 葡萄糖檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理：當(dāng)顯色溶液作用于樣本時(shí)，樣本中的葡萄糖會(huì)因顯色劑中變旋酶的作用，迅速?gòu)?alpha;型轉(zhuǎn)換為β型。β-D-葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下被氧化，同時(shí)產(chǎn)生過(guò)氧化氫。產(chǎn)生的過(guò)氧化氫在共存的過(guò)氧化物酶（POD）作用下，與顯色試劑中的苯酚和4-氨基安替吡啉發(fā)生定量氧化縮合，產(chǎn)生紅色色素。通過(guò)檢測(cè)紅色色素的吸光度，可定量檢測(cè)樣本中的葡萄糖濃度。

圖1．LabAssay™ 葡萄糖檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理

基質(zhì)濃度的研討

本來(lái)GOD僅與β-D-葡萄糖反應(yīng)，但由于其對(duì)麥芽糖也具有弱特異性，因此即使背景上升，也可能沒(méi)辦法準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)抑制作用。因此，要在檢測(cè)IC50值的基礎(chǔ)上探討較佳的麥芽糖濃度。麥芽糖和顯色試劑反應(yīng)30分鐘后，在濃度為18.5mmol/L以下時(shí)，空白吸光度變?yōu)?.1以下，因此采用濃度18.5mmol/L以下作為候選濃度（表1）（制備方法參照?qǐng)D3）。

表1．麥芽糖濃度的研討

麥芽糖濃糖（mmol/L）	0	7.4	18.5	37	74
吸光度（A₅₀₅）	0.036	0.057	0.099	0.183	0.337

接下來(lái)，研究濃度為18.5mmol/L以下的麥芽糖中酶活性的結(jié)果，維持酶活性2小時(shí)以上的基質(zhì)濃度為18.5mmol/L，因此麥芽糖的最終濃度定為18.5mmol/L。（圖2）

圖2．酶反應(yīng)曲線(xiàn)

試劑盒中含有的酶試劑是從大鼠小腸來(lái)源的刷狀緣膜中提取后，通過(guò)離心處理得到的較適成分的懸濁液。若粒子粒徑大，會(huì)迅速沉淀，在收集時(shí)會(huì)導(dǎo)致測(cè)量值產(chǎn)生波動(dòng)。因此，為了防止試劑盒中酶試劑的迅速沉淀，采用減小粒子粒徑的制造方法，使測(cè)量值不會(huì)產(chǎn)生波動(dòng)。表2顯示了使用阿卡波糖作為抑制劑的三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果（制備方法參照?qǐng)D3）。

表2．阿卡波糖的IC₅₀值

基質(zhì)	IC₅₀值（μg/mL）	CV值（%）
麥芽糖	0.10	1.8
蔗糖	1.28	0.9

試劑盒操作步驟

圖3．試劑盒操作步驟
基質(zhì)液和酶稀釋劑等的詳細(xì)制備方法請(qǐng)參考產(chǎn)品附帶的使用說(shuō)明書(shū)。

在"試劑盒"的基質(zhì)（麥芽糖，蔗糖）溶液中，加入連續(xù)稀釋后的檢測(cè)樣本（α-葡糖苷酶抑制劑）溶液以及 "試劑盒"中的α-葡萄糖苷酶懸濁液。在37℃下反應(yīng)后，在沸水浴中加熱使反應(yīng)終止，用"LabAssay™ 葡萄糖檢測(cè)試劑盒"定量檢測(cè)游離的葡萄糖，并計(jì)算出樣本的IC50值（圖3）。

結(jié)語(yǔ)

本試劑盒的開(kāi)發(fā)使α-葡萄糖苷酶抑制劑的IC50值的測(cè)定成為可能。期待該試劑盒在今后的各種功能性食品的開(kāi)發(fā)和探索中給與一臂之力。

α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	包裝
297-78601	α-Glucosidase Inhibitory Activity Assay Kit α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒	食品分析用	96次

α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測(cè)試劑盒能測(cè)定對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用。與LabAssay™ 葡萄糖（血糖）檢測(cè)試劑盒配套使用，可用于檢測(cè)食品等成分中對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。

酶試劑	1mL	2	α-葡萄糖苷酶
緩沖劑	50mL用	2	馬來(lái)酸/順丁烯二酸二鈉
基質(zhì)液1	20mL用	2	D-(+)-麥芽糖
基質(zhì)液2	20mL用	2	蔗糖
陽(yáng)性對(duì)照	100mg	1	阿卡波糖

*阿卡波糖是一種新型口服降糖藥。在腸道內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性抑制葡萄糖苷水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應(yīng)減緩，因此可具有使飯后血糖降低的作用。

<試劑盒以外所需的器具器材>
●　LabAssay™葡萄糖檢測(cè)試劑盒.［產(chǎn)品編號(hào). 298-65701］
●　96孔透明微孔板
●　酶標(biāo)儀（505nm吸光Filter）
●　微量移液器
●　恒溫槽（37℃）

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