西寶生物——Wako生物制藥中殘余DNA抽提試劑盒

來源：作者：人氣：-發表時間：2018-11-08 13:20:00【大中小】

Wako DNA Extractor® Kit（貨號：295-50201）,用于提取生物制品中宿主殘余DNA，具有靈敏度高(低至10pg)，安全，時間短，操作方便，回收率高等特點。西寶生物是WAKO的一級代理，品質保證，貨期穩定，詳情致電400-021-8158！

在工業生產的疫苗和治病用生物制品（干擾素、白細胞介素、單克隆抗體、重組蛋白）中，宿主細胞殘余DNA污染直接影響產品和整個生產過程的質量和產量，可能引起動物致瘤、感染病毒DNA等嚴重后果，中國藥典、WHO、EU、FDA對宿主細胞DNA殘留限量都有規定。傳統的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的穩定和促進下降解細胞中的蛋白質特別是核酶，再經有機溶劑萃取得到高質量的DNA，但毒DNA和生物制品宿主細胞殘余DNA的提取試劑盒。使用新型提取步驟，用碘化鈉（NaI）作為促溶劑，穩定且靈敏度高、時間短，無有毒溶劑，無需復雜和費力操作，即可從樣品中得到高質量和高回收率的DNA。

DNA Extractor® Kit說明書 No.295-50201

本產品是血清中含有的病毒DNA和生物制品宿主細胞殘余DNA的提取試劑盒,無有毒溶劑、提取時間短、DNA提取純度高、DNA回收率高。

■ DNA抽提原理

高濃度的促溶劑碘化鈉和陰離子去垢劑參與生物制品中蛋白質和脂質的溶解，然后在混合物中加入異丙醇，糖原和核酸共沉淀可作為載體，而碘化鈉和陰離子去垢劑阻止樣品中蛋白等成分的沉淀使其溶于液相，從而選擇性沉淀DNA。

■ 試劑

1．試劑盒組分：

1）碘化鈉溶液 1 x 26 ml

2）月桂酰肌氨酸鈉 1 x 1.2 ml

3）洗滌溶液（A） 1 x 42 ml

4）洗滌溶液（B） 2 x 40 ml

5）糖原溶液 1 x 0.1 ml

2．必需的試劑和儀器：

試劑：

1）異丙醇（特級） 40 ml

2）蒸餾去離子水 6 ml

儀器：

1）微型離心機（Max. 12,000 g）

2）有蓋微量離心管（1.5 or 2 ml）

3）旋渦混合器

■ 保存

2 - 10℃，試劑盒的保存期為2 - 3 年。

■ 實驗方案

方案1：血清中DNA 提取操作步驟

試劑準備：

1） DNA 提取之前，試劑提取如下：

26 ml 碘化鈉溶液加入6 ml 蒸餾去離子水稀釋，

再加入1 ml 月桂酰肌氨酸鈉和65 μl 糖原溶液并混合均勻。

2）向洗滌溶液（B）加入2 μl 糖原溶液并立即混合均勻。

注意事項：

1）用于稀釋Nal 溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。

2）配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原溶液到無菌離心管中至合適體積即可。

3）在保存期間Nal 溶液會結晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。

DNA 提取步驟：

1）吸取100 μl 的血清樣品加入1.5 ml 微量離心管；

2）再加入300 μl 配制好的Nal 溶液至離心管并混合均勻；

3）將離心管在60℃恒溫容器中加熱15 分鐘；

4）取出離心管，加入400 μl 異丙醇至離心管并混合均勻；

5）離心管在室溫靜置15 分鐘后離心10,000 g 15 分鐘；

6）盡可能多地吸取上清液，將離心管倒置在紙面上除去殘留溶液；

7）加入1 ml 配制好的洗滌溶液（B）重懸浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀從離心管壁上彈開；

8）短暫離心10,000 g 5 min，去除上清液，將剩余沉淀真空干燥，用于后續的DNA 分析。

方案2: Threshold* 系統DNA定量法的預處理

試劑預處理:

1）將65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化鈉溶液；

2）將2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗滌溶液（B），立即混合均勻。

注意事項：

1）用于稀釋碘化鈉溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。

2）配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原溶液到無菌離心管中至合適體積即可。

3）在保存期間碘化鈉溶液會結晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。

4）提取步驟應在DNA 變性之前，因此重要的是使用無菌技術盡可能降低DNA 污染。預先包裝好的無菌吸管、無菌試管和手套都要經過此步驟。

DNA 提取步驟：

1）吸取400 μl 或500 μl 的樣品加入2 ml 無菌帶蓋微量離心管并混合均勻；

2）吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸鈉溶液加入微量離心管并混合均勻；

3）再加入500 μl 包含糖原的碘化鈉溶液至混合溶液，渦旋后在40℃保溫15 分鐘；

4）加入900 μl 異丙醇至混合溶液，渦旋后靜置于室溫15 分鐘；

5）短暫離心10,000 g 15 min 后，能看見管壁有白色沉淀，吸取上清液后將離心管倒置于紙面去除殘留溶液；

6）加入800 μl 洗滌溶液（A）至離心管，劇烈渦旋使白色沉淀從離心管壁上彈開；

7）短暫離心10,000 g 5 min 后，去除殘留溶液；

8）加入1500 μl 包含糖原的洗滌溶液（B）至離心管并渦旋，短暫離心10,000 g 5 min 后吸取上清液，剩余的白色沉淀包括DNA 和糖原載體；

9）加入分析用緩沖液(Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后續的DNA 分析。

注意事項：

請于各步驟使用攪拌器將溶液攪拌均勻。樣品溶液里含有DNA酶時，進行步驟2之前請先進行步驟3。步驟4里樣品溶解不完全時，請把保溫溫度升至40-60℃幫助溶解。但是含有部分蛋白（γ-球蛋白）或高濃度蛋白的樣品（＞50mg/ml），加熱可能會導致蛋白聚集，請注意。

Wako DNA Extractor®提取試劑盒產品選擇訂購熱線：400-021-8158
樣本	全血	血清	血漿	組織	石蠟包埋組織切片	生物制藥	培養細胞	頭發、指甲、血跡、唾液
基因組DNA	DNA Extractor ® WB Kit DNA Extractor ® WB-Rapid Kit			DNA Extractor ® WB Kit	DNA Extractor ® SP kit DNA Isolator PS-Rapid Reagent		DNA Extractor ® WB Kit	DNA Extractor ® FM kit
線粒體DNA（mt DNA）	mtDNA Extractor ® WB Kit			mtDNA Extractor® WB Kit			mtDNA Extractor ® CT Kit
游離DNA		DNA Extractor ® SP kit	DNA Extractor ® SP kit
低氧化程度的DNA	DNA Extractor ® WB Kit			DNA Extractor ® TIS kit			DNA Extractor ® TIS kit
細菌基因組DNA		DNA Extractor ® kit				DNA Extractor ® kit
病毒DNA		DNA Extractor ® kit

DNA Extractor® 系列產品列表訂購熱線：400-021-8158
產品編號	產品名稱	規格	樣品類型	原理	特點	試劑盒組成
生物制品中的殘余DNA提取
295-50201	DNA Extractore® Kit Wako 生物制藥殘余DNA抽提試劑盒	50次	生物制藥血清	碘化鈉法	生物制品中的殘余DNA提取	碘化鈉溶液月桂酰肌氨酸鈉溶液洗滌液(A) 洗滌液(B) 糖原溶液	26ml×1 1.2mL×1 42mL×1 40mL×2 0.1mL×1
血清和血漿中的DNA提取
296-60501	DNA Extractor® SP Kit 血清血漿中DNA抽提試劑盒	50次	血清和血漿	碘化鈉法	1、高靈敏度僅需100 μL血清或血漿樣品，高DNA產量; 2、整個提取過程在單獨的離心管中，無交叉污染; 3、特別配制的乙醇能完全去除血液中的脂質	酶反應液蛋白質消化液碘化鈉溶液乙醇溶液洗滌液(A) 洗滌液(B)	10ml×1 25μL×1 15mL×1 30mL×1 50mL×1 50mL×1
人和動物組織中的DNA提?。ㄓ糜?-羥基脫氧鳥苷檢測）
296-67701	DNA Extractor® TIS Kit 人和動物薄壁組織中尿8-羥基脫氧鳥苷DNA抽提試劑盒	50次	組織培養細胞	碘化鈉法	1、用于8-羥基脫氧鳥苷(氧化應激標志物）檢測和鑒定； 2、抗氧化劑阻止更進一步的DNA氧化	裂解液酶反應液蛋白酶溶液蛋白消化液氧化抑制劑碘化鈉溶液乙醇溶液 PEG溶液	75mL×2 15ml×1 50μL×1 750μL×1 350μL×1 15mL×1 30mL×1 20mL×1
全血中的DNA提取
291-50502	DNA Extractor® WB Kit 全血DNA抽提試劑盒	50次	全血組織培養細胞	碘化鈉法	1、高DNA回收率; 2、整個提取過程在單獨的離心管中，無交叉污染	裂解液酶反應液碘化鈉溶液洗滌液(A) 洗滌液(B) 蛋白酶	65ml×2 10mL×1 15mL×1 50mL×1 50mL×1 10mg×1
297-54801 293-54803	DNA Extractor® WB-Rapid Kit 全血DNA抽提試劑盒	20次 200次	全血		比DNA Extractor® WB Kit實驗步驟更少、提取時間更短(30分鐘以內)。	裂解液酶反應液洗滌液蛋白酶溶液	20次反應 10mL×1 0.8mL×1 20mL×1 40μL×1	200次反應 50mL×1 8mL×1 70mL×3 400μL×1
石蠟包埋組織的DNA提取
295-52401	DNA Isolator PS Kit 石蠟包埋組織DNA抽提試劑盒	100次	石蠟包埋組織			酶反應液酶激活劑蛋白酶 DNA沉淀促進劑 DNA稀釋劑	2ml×1 34mg×1 2.2mg×1 0.5mL×1 0.5mL×1
291-56401	DNA Isolator PS-Rapid Reagent 石蠟包埋組織DNA抽提試劑盒	100次	石蠟包埋組織	煮沸法		DNA提取溶液	10mL×5
全血中線粒體DNA提取
293-54401	mtDNA Extractor® WB Kit 全血中線粒體DNA抽提試劑盒	25次	全血	碘化鈉法	全血中線粒體 DNA提取可在90分鐘內完成	白血球提取溶液 DNA提取溶液\| DNA提取溶液\|\|（A） DNA提取溶液\|\|（B） DNA提取溶液\|\|\| 碘化鈉溶液洗滌液	5.0ml×1 26.5ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1
培養細胞和組織樣品中的線粒體DNA提取
291-55301	mtDNA Extractor® CT Kit	25次	組織培養細胞	碘化鈉法	培養細胞和組織樣品中的線粒體 DNA提取	勻漿液援沖液 DNA提取溶液\| DNA提取溶液\|\|（A） DNA提取溶液\|\|（B） DNA提取溶液\|\|\| 碘化鈉溶液洗滌液	25.0ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1
法醫學調查的DNA提取
295-58501	DNA Extractor® FM Kit 法醫學研究DNA抽提試劑盒	50次	頭發指甲血跡唾液	碘化鈉法	在幾十分鐘內可溶解多種毛發	裂解液酶激活試劑（EAR) 再水化液蛋白酶碘化鈉溶液洗滌液（A）洗滌液（B）	9.5ml×1 80mg×1 0.5ml×1 10mg×1 12.5mL×1 50mL×1 50mL×1
上述試劑僅供實驗研究用，不可用作“醫藥品”、“食品”、“臨床診斷”等。