胃蛋白酶原II（PGII）-磁微粒化學發光法（AE/AP）/熒光免疫層析解決方案（含保護劑評估）

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-10-25 15:35:00【大中小】

1.項目背景

摘自《中國胃癌篩查與早診早治指南（2022）》

PG是胃蛋白酶的無活性前體，可分為PGI和PGII種亞型。PGI主要由胃體和胃底腺的主細胞和頸黏液細胞分泌，而 PGII除由胃底腺分泌外，胃竇幽門腺和近端十二指腸 Brunner腺亦可分泌。當胃黏膜發生萎縮時，血清PGI水平和（或）PGI/II比值（PGR）降低。血清中約存在人體1%的PG，其血清水平可作為胃黏膜形態和功能狀態的標志，聯合Hp檢測可識別出胃癌的高危個體。一項納入27項人群篩查研究和15項針對特定高危人群（如萎縮性胃炎）研究、涉及約30萬例受試者的Meta分析結果顯示，在一般人群研究中血清PG（PGI≤70ng/ml，PGR≤3）檢測診斷胃癌的靈敏度和特異度分別為77%和73%，在特定高危人群中靈敏度和特異度分別為57%和80%。另有3項 Meta分析評估了PG檢測對胃癌診斷的靈敏度和特異度，結果顯示，血清PG檢測對胃癌診斷的靈敏度和特異度分別為57%～69%和 73%～85%。

2.性能表現

針對PGII的檢測，西寶生物推出4種單克隆抗體和1種重組抗原適合化學發光（AE/AP）和熒光層析平臺。具體性能如下

（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行抗體交叉配對驗證）。

2.1化學發光（AE）平臺：

組合1（兩試劑模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289D）標記吖啶酯；

組合2（三試劑模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290D）標記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289D）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）；

組合3（三試劑模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289D）標記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290D）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）；

線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。

濃度值在1000ng/mL以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.2化學發光（AP）平臺：

組合4（兩試劑模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶；

組合5（三試劑模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289E）標記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）。

線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。

濃度值在1000ng/mL以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.3熒光免疫層析平臺：

組合6：

胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289E）標記熒光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）劃膜；

線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。

濃度值在1000ng/mL以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.4 穩定性評估

2.4.1 堿性磷酸酶標記抗體穩定性

A）胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示，PGII ALP酶工作液37℃儲存熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值平均降幅超過30%以上，表明PGII ALP酶工作液熱穩定性差。

表1 PGII ALP酶工作液熱穩定性3天數據（不含保護劑）

序號	PGII質控品濃度ng/mL	PGII ALP酶工作液37℃儲存熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值均值差異
Q1	5	-31.0%
Q2	12.5	-35.5%
Q3	50	-33.6%
平均變化		-33.4%

B）在AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續進行胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶的37℃熱穩定性實驗。如表2所示，PGII ALP酶工作液37℃儲存熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均降幅在10%左右，表明PGII ALP酶工作液熱穩定性良好。本實驗表明蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）對PGII ALP酶工作液的穩定性有很大幫助。

表2 PGII ALP酶工作液熱穩定性7天數據（含保護劑）

序號	PGII質控品濃度ng/mL	PGII ALP酶工作液37℃儲存熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
Q1	5	-8.1%
Q2	12.5	-10.5%
Q3	50	-9.9%
平均變化		-9.5%

2.4.2 PGII抗原穩定性

A）采用PGII抗原稀釋液（貨號：DCD0521A）將PGII抗原（貨號：EKY0732B）稀釋成3個梯度（液體型），進行37℃熱穩定性實驗。如表3所示，PGII抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值平均降幅超過80%以上，表明PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩定性非常差。

表3 PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩定性3天數據

序號	PGII 質控品濃度ng/mL	PGII 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值均值差異
Q1	5	-85.0%
Q2	12.5	-85.1%
Q3	50	-87.1%
平均變化		-85.7%

B）采用PGII抗原稀釋液（貨號：DCD0521A）將PGII抗原（貨號：EKY0732B）稀釋成3個梯度做凍干（凍干型），進行37℃熱穩定性實驗。如表4所示，PGII抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均降幅在5%左右，表明PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩定性良好。

表4 PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩定性7天數據

序號	PGII 質控品濃度ng/mL	PGII 抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
Q1	5	-3.9%
Q2	12.5	-3.7%
Q3	50	-2.9%
平均變化		-3.5%

3.臨床相關性

3.1化學發光（AE）平臺：

西寶生物發光（AE）平臺PGII抗體配對組合1（兩試劑模式）與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

西寶生物發光（AE）平臺PGII抗體配對組合2（三試劑模式）與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好。

西寶生物發光（AE）平臺PGII抗體配對組合3（三試劑模式）與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好。

3.2化學發光（AP）平臺：

西寶生物發光（AP）平臺PGII抗體配對組合4（兩試劑模式）與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

西寶生物發光（AP）平臺PGII抗體配對組合5（三試劑模式）與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好。

3.3熒光免疫層析平臺：

西寶生物熒光平臺PGII抗體配對組合6與邁瑞醫療PGII試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性（≤20ng/mL）R²在0.90左右，相關性較好；（＜100ng/mL）R²>0.95，相關性良好。

4. 測試方案

4.1化學發光（AE）平臺

4.1.1抗體配對組合1（兩試劑模式）：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

試劑1：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號：EKN0290D）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號：EKN0289D）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。

4.1.2抗體配對組合2（三試劑模式）：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測試；

試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290D）標記-生物素稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289D）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。

4.1.3抗體配對組合3（三試劑模式）：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測試；

試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289D）標記-生物素稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290D）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2化學發光（AP）平臺

4.2.1抗體配對組合4（兩試劑模式）：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289E）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進行測試。

4.2.2抗體配對組合5（三試劑模式）：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測試；

試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0289E）標記-生物素稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號：EKN0290E）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量100ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+100ul試劑2混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。

4.3熒光免疫層析平臺抗體配對組合5：

待測抗原:PGII抗原（貨號：EKY0732B）

反應條件：

樣品+稀釋液混勻（本次按照1:5稀釋），上樣，反應時間（10min-15min）；

測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
AP酶標記物稀釋液	DCD0519A	/
蛋白保護劑GH	DCL0009A	推薦使用濃度20%左右
PGII抗原稀釋液	DCD0521A	/
胃蛋白酶原II（PGII）抗體	EKN0290D	胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289D）標記吖啶酯（發光配對組合1）胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）標記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289D）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）（發光配對組合2）胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289D）標記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）（發光配對組合3）胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶（發光配對組合4）胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）標記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）（發光配對組合5）胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）標記熒光微球+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290E）劃膜（熒光配對組合6）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體	EKN0289D
胃蛋白酶原II（PGII）抗體	EKN0289E
胃蛋白酶原II（PGII）抗體	EKN0290E
胃蛋白酶原（PGII）抗原	EKY0732B
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1334A
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）標記生物素濃縮液	DKY1334B
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290D）標記吖啶酯濃縮液	DKY1334C
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289D）標記生物素濃縮液	DKY1334D
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289D）吖啶酯濃縮液	DKY1334E
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1334F
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）標記生物素濃縮液	DKY1334G
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0290E）標記堿性磷酸酶濃縮液	DKY1334H
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號：EKN0289E）標記熒光微球濃縮液	DKY1334I
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
鏈霉親和素磁性微球，1.5um	DEG0814A-10ml
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）	AEG0786B