EV-Up(TM)間充質(zhì)干細(xì)胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基
細(xì)胞外囊泡（Extracellular vesicle : EV）是由細(xì)胞釋放的脂質(zhì)雙分子層包被的膜囊泡，作為細(xì)胞間的通訊工具發(fā)揮作用。外泌體屬于EV的一種，被認(rèn)為參與多種生物功能的控制，并有望用作疾病生物標(biāo)記物或治療制劑。在治療制劑的應(yīng)用方面，具有抗炎和抗纖維化作用的間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cell：MSC）來(lái)源外泌體備受矚目，其未來(lái)的實(shí)用性被寄予厚望。對(duì)MSC來(lái)源外泌體實(shí)際應(yīng)用的期望不斷提升，同時(shí)外泌體作為治療制劑的生產(chǎn)技術(shù)研發(fā)也在積極進(jìn)行。
本文將介紹由FUJIFILM Wako自主研發(fā)的無(wú)血清培養(yǎng)基，在生產(chǎn)用于治療的MSC來(lái)源外泌體方面的實(shí)用性。西寶生物科技（上海）股份有限公司是Wako的授權(quán)一級(jí)代理，如您對(duì)產(chǎn)品感興趣，咨詢訂購(gòu)熱線：400-021-8158
EV-Up™外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基，間充質(zhì)干細(xì)胞專用
無(wú)血清 無(wú)動(dòng)物源成分
EV-Up™間充質(zhì)干細(xì)胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基是一種間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）專用的外泌體（EVs）生產(chǎn)培養(yǎng)基。只要將EV-Up™間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無(wú)動(dòng)物源成分添加至EV-Up™間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無(wú)動(dòng)物源成分中配成完全培養(yǎng)基即可使用。本品不含血清及動(dòng)物源成分， 適用于多種組織來(lái)源的MSCs的培養(yǎng)。
◆ 特點(diǎn)
● 比血清培養(yǎng)基的外泌體分泌量高
● 培養(yǎng)的外泌體活性高
● 維持MSC的高存活率
● 培養(yǎng)的外泌體活性高
● 維持MSC的高存活率
◆ 適用細(xì)胞
適用于多種組織來(lái)源的MSC。
細(xì)胞種類：骨髓來(lái)源的MSC，脂肪來(lái)源的MSC，臍帶基質(zhì)來(lái)源的MSC等。
◆ 使用方法
*往EV-Up™間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無(wú)動(dòng)物源成分（產(chǎn)品編號(hào)：053-09451）中添加了EV-Up™間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無(wú)動(dòng)物源成分（產(chǎn)品編號(hào)：298-84001）即為EV-Up™完全培養(yǎng)基
6孔板培養(yǎng)
1. 將各種間充質(zhì)干細(xì)胞以5×103的密度來(lái)鋪板，然后用增殖培養(yǎng)基（血清培養(yǎng)基或無(wú)血清培養(yǎng)基）培養(yǎng)至80-90%匯合。
2. 去除增殖培養(yǎng)基后加入4 mL EV-UP™完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)3-5日。
3. 回收培養(yǎng)上清，2,000×g離心20分鐘，用干凈試管收集離心后的上清液，避免吸入沉淀。
※ 可在培養(yǎng)上清中添加1/100的EV-Save™細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑來(lái)抑制試管或吸頭等對(duì)EV的吸附。
4. 用MagCapture™外泌體提取試劑盒PS提取培養(yǎng)上清中的外泌體。
◆ 應(yīng)用數(shù)據(jù)
外泌體粒子數(shù)
利用PS親和法*1從各種培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清液中提取外泌體，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技術(shù)對(duì)外泌體的粒子數(shù)進(jìn)行分析。
*1：在金屬離子的存在下，結(jié)合分子通過磷脂酰絲氨酸（PS）捕獲細(xì)胞外囊泡后，再使用螯合劑洗脫的方法。
使用MagCapture™外泌體提取試劑盒PS時(shí)，可以通過本方法進(jìn)行外泌體提取。
*2：Exosome-Depleted FBS
EV-Up™ 完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)MSC時(shí)，釋放的外泌體粒子數(shù)是D-MEM+10% EV depleted FBS培養(yǎng)的2.6倍左右。另外，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基相比，可以分泌更多的EV。
抗纖維化活性
用TGFβ刺激培養(yǎng)人胎肺成纖維細(xì)胞（TIG3細(xì)胞），用PS親和法從不同培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清中提取EV，取5×107 particles/mL提取出的EV，用RT-PCR對(duì)纖維化標(biāo)記物（Collagen III，αSMA）的基因表達(dá)水平進(jìn)行定量，以比較抗纖維化活性。
使用EV-Up™ 完全培養(yǎng)基的EV，強(qiáng)力抑制了由TGFβ引起的纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。由此可見，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培養(yǎng)基能培養(yǎng)出的外泌體活性更高。
細(xì)胞存活率
將在血清培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)的人骨髓來(lái)源的MSC用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)5天，然后檢測(cè)產(chǎn)生外泌體后的細(xì)胞存活率。
EV-Up™ 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的MSC與D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同樣高的細(xì)胞存活率。
外泌體標(biāo)志物蛋白表達(dá)
用PS親和法從培養(yǎng)上清液中提取外泌體，并通過ELISA檢測(cè)標(biāo)記蛋白CD9、CD63和CD81的表達(dá)。
EV-Up™ 完全培養(yǎng)基與其他血清培養(yǎng)基相比，不同外泌體標(biāo)記分子的表達(dá)更好。
◆ 產(chǎn)品信息
EV-Up™ MSC專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基
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產(chǎn)品貨號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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包裝
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053-09451
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EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF
EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無(wú)動(dòng)物源成分
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for Cell Culture
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95 mL
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298-84001
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EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF
EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無(wú)動(dòng)物源成分
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for Cell Culture
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5 mL（100 mL用）
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外泌體防吸附&凍結(jié)保護(hù)試劑
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產(chǎn)品貨號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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包裝
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058-09261
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EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent
EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑 |
for Genetic Research
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1 mL
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外泌體提取和純化試劑
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產(chǎn)品貨號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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包裝
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299-77603
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MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
MagCapture™外泌體提取試劑盒PS |
for Genetic Research
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2 tests
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293-77601
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10 tests
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290-80301
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PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit
PS Capture™外泌體提取樹脂試劑盒 |
for Genetic Research
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1 kit （0.5 mL 漿狀）
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294-84101
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MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™外泌體提取試劑盒PS Ver.2 |
for Genetic Research
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2 tests
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290-84103
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10 tests
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◆ 參考文獻(xiàn)
1） Colombo, M. et al. : Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 30, 255（2014）.
2） Mathieu, M. et al. : Nat. Cell Biol., 21（1）, 9（2019）.
3） Phinney, D. G. and Pittenger, M. F. : Stem Cells, 35（4）, 851（2017）.
4） Rajendran, R. L. et al. : Sci. Rep., 7（1）, 15560（2017）.
5） Lai, R. C. et al. : Stem Cell Res ., 4（3）, 214（2010）.
6） Nakai, W. et al. : Sci. Rep., 6, 33935（2016）.
7） Ma, Y. et al. : Sci. Rep., 11（1）, 13471（2021）.
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7） Ma, Y. et al. : Sci. Rep., 11（1）, 13471（2021）.
◆ 相關(guān)產(chǎn)品
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