• 什么是內(nèi)毒素？
• 關(guān)于內(nèi)毒素的檢測(cè)方法？
• 內(nèi)毒素檢測(cè)用具的要求？

根據(jù)檢測(cè)目的使用適當(dāng)類型的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品。

•需符合BET（美國(guó)藥典/ 歐洲藥典 / 日本藥典）的檢測(cè)，例如藥品和醫(yī)療器械的產(chǎn)品終檢驗(yàn)

→必須使用美國(guó)藥典，歐洲藥典或日本藥典標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

•對(duì)材料，工藝流程和其他相關(guān)主題的檢測(cè)

→可以使用內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）。

有時(shí)候需要采取預(yù)防措施，以防止樣本對(duì)內(nèi)毒素檢測(cè)有潛在影響（反應(yīng)干擾）。這些干擾分為以下兩種類型：

>•蛋白變性劑（例如酸，堿，尿素，表面活性劑，有機(jī)溶劑）

•蛋白酶和蛋白酶抑制劑

•螯合劑（會(huì)清除反應(yīng)所需的鈣和鎂）

•對(duì)于比色法：著色物質(zhì)（在約405 nm處具有相當(dāng)大吸收的物質(zhì)）

•對(duì)于比濁法：濁度

•金屬離子（例如鐵，鋁，鎵和鉻離子。即使微摩爾級(jí)別的存在也會(huì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生影響）

•表面活性劑

樣本的干擾效果可以通過(guò)進(jìn)行藥典中的干擾因子測(cè)試來(lái)衡量：即通過(guò)對(duì)加標(biāo)了已知量的內(nèi)毒素的樣本進(jìn)行檢測(cè)，獲得加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率。如果回收率在50％至200％范圍內(nèi)，則可以確定該樣本不會(huì)造成影響，換句話說(shuō)，檢測(cè)所得的內(nèi)毒素濃度是正確的。如果發(fā)現(xiàn)樣本會(huì)造成影響，可以通過(guò)對(duì)樣本溶液進(jìn)行稀釋，從而減少對(duì)測(cè)試的影響。然而，對(duì)樣本溶液的稀釋會(huì)提高了由原始溶液（預(yù)稀釋溶液）的濃度轉(zhuǎn)換而得的內(nèi)毒素濃度值。合理的稀釋倍數(shù)，是根據(jù)待檢測(cè)的內(nèi)毒素的所需濃度以及所用LAL試劑的檢測(cè)靈敏度來(lái)確定的。

LAL試劑和內(nèi)毒素的級(jí)聯(lián)反應(yīng)機(jī)制如圖4所示。如果反應(yīng)體系中存在（1→3）-β-D-葡聚糖*，會(huì)激活G因子，引起伴有凝膠化的假陽(yáng)性反應(yīng)。在這種情況下，無(wú)論體系中是否存在內(nèi)毒素，都會(huì)發(fā)生反應(yīng)，意味著無(wú)法對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行特異性檢測(cè)。為此，我們研發(fā)出Wako's Limulus ES，該產(chǎn)品通過(guò)在反應(yīng)體系中加入過(guò)量共存的（1→3）-β-D-葡聚糖（羧甲基化凝膠多糖），從而來(lái)抑制（1→3）-β-D-葡聚糖的干擾。因此，β-葡聚糖對(duì)LAL試劑的活化受到抑制，從而使內(nèi)毒素特異性檢測(cè)能夠進(jìn)行。過(guò)量的β-葡聚糖可以抑制其自身反應(yīng)的原理如圖5所示：β-葡聚糖和LAL試劑之間反應(yīng)的濃度范圍對(duì)于整個(gè)反應(yīng)而言很窄。另一方面，內(nèi)毒素和鱟試劑的反應(yīng)在很寬的濃度范圍內(nèi)都會(huì)發(fā)生，并且不受大量共存的β-葡聚糖的任何干擾。Wako的LimulusES就是根據(jù)這個(gè)原理而制作的（見(jiàn)圖6）。

使用Toxinometer®（檢測(cè)時(shí)間設(shè)定為99 min）和Limulus HS進(jìn)行檢測(cè)。

○：在99 min內(nèi)檢測(cè)不到凝膠的生成

●：有凝膠的生成

A：Limulus HS

B：Limulus ES

○：內(nèi)毒素的系列稀釋

▲：含有1 μg/mL羧甲基化凝膠多糖的內(nèi)毒素系列稀釋