FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2020-05-25 14:33:00【大中小】

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖是一類多糖衍生物，既帶游離伯胺和羧酸，也帶有熒光染料熒光素（FTIC）。賴氨酸是一種天然存在的氨基酸，在生物化學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域廣泛用于結(jié)合和固定。

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖也被稱為Fluoro-emerald®或fluoroemerald ®。經(jīng)純化后，所有批次都需檢測分子量，取代度，干燥失重和游離FITC。FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖為黃色至橙色粉末，分子量范圍從4 kDa到500 kDa。

熒光素(FITC)是一種熒光明亮的染料，廣為使用，在493nm吸收。在520nm處發(fā)光。高質(zhì)量的FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖具備:

優(yōu)異的分子量分布（多分散性低）
明亮的熒光
可用于細(xì)胞和組織的固定
易與染料或生物分子結(jié)合
完全水溶性，在溶液或保質(zhì)期內(nèi)具有穩(wěn)定性佳

結(jié)構(gòu)

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖由來源于腸系膜明串珠菌的特征鮮明的葡聚糖組分合成。葡聚糖先用賴氨酸標(biāo)記，然后在溫和條件下使用FITC功能化，形成FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖。賴氨酸的取代度在0.005-0.03 (mol賴氨酸/mol葡萄糖)，而FITC的取代度為0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。

圖 1. FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖的結(jié)構(gòu)式。賴氨酸主要和葡聚糖在賴氨酸的ε-還是α-氨基位置結(jié)合未明確。

賴氨酸葡聚糖 (or Dextran-lysine-fixable) 是由來自腸系膜白串珠菌的葡聚糖的特定片段通過賴氨酸標(biāo)記而合成的。然后用FITC在溫和條件下功能化得到FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖。經(jīng)純化，控制產(chǎn)品的分子量，外觀，溶解度，取代度，pH，游離賴氨酸和游離FITC。產(chǎn)品的分子量是由對應(yīng)的葡聚糖片段的相近分子量來確定的。例如，F(xiàn)ITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖4的分子量大約為4000 Da。實際分子量是通過GPC測定的。葡聚糖來源于腸系膜白串珠菌B-512F,由α-D-(1-6)線性葡聚糖組成， α-(1-3) 側(cè)鏈含量較低（2-5%）。葡聚糖的分子量范圍從4000 到500000，并且通過GPC，比旋，吸光率和其它參數(shù)嚴(yán)格控制質(zhì)量。

物理性質(zhì)

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖是黃色至橙色粉末，極易溶于水或電解質(zhì)溶液中。FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖不溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，例如乙醇，甲醇，丙酮，氯仿，乙酸乙酯等。賴氨酸的取代度為0.005-0.03(mol賴氨酸/mol葡萄糖)。FITC的取代度是 0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。熒光素/FITC的最大激發(fā)波長為493 nm，最大發(fā)射波長為 520nm (圖2)。

圖2. FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖70在 pH 7.4 PBS溶液中(10 mg in 50 mL)的熒光圖譜。激發(fā)/發(fā)射波長493/516 nm。

儲存和穩(wěn)定性

FITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖的穩(wěn)定性研究之前未見諸報道。不過，但根據(jù)葡聚糖的性質(zhì)和賴氨酸與葡聚糖鏈的碳酰二胺化學(xué)鍵判斷，該物質(zhì)具有較好的穩(wěn)定性。FITC和賴氨酸之間的硫脲鍵是穩(wěn)定的。若容器密封完好，室溫干燥條件下，F(xiàn)ITC標(biāo)記賴氨酸葡聚糖可以穩(wěn)定保持6年。

應(yīng)用

攜帶氨基的葡聚糖，作為生物結(jié)合和活體固定的工具（1,2），對于科學(xué)界而言價值非凡。賴氨酸結(jié)構(gòu)中的游離氨基可以與激活的基團(tuán)以共價鍵結(jié)合，例如NHS酯或異氰酸酯，或者，與羧酸通過常規(guī)的肽偶聯(lián)劑偶聯(lián)，例如DCC，HOBt 以及HATU。細(xì)胞和組織固定，使組分保持“類活體態(tài)”，并保持細(xì)胞滲透性，允許抗體可以進(jìn)入細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)，應(yīng)用舉例，用于顯微研究和免疫轉(zhuǎn)染。賴氨酸結(jié)合葡聚糖通過與固定劑反應(yīng)（本文使用的是甲醛或戊二醛），與類似蛋白質(zhì)和脂質(zhì)體的生物大分子形成共價交聯(lián)，使整個體系和葡聚糖固定。這個在分子成像定性或定量評估生物事件時，具有十分獨特的重要意義。如果沒有固定，在活體系統(tǒng)內(nèi)的這些結(jié)構(gòu)將迅速分散和分解。熒光素/FITC最大激發(fā)波長為493 nm，最大發(fā)射波長為 520nm 。

產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號	品名	分子量(kDa)	包裝
FLD4-10mg	FITC-lysine-dextran 4	4	10 mg
FLD4-5mg	FITC-lysine-dextran 4	4	5 mg
FLD10-10mg	FITC-lysine-dextran 10	10	10 mg
FLD10-50mg	FITC-lysine-dextran 10	10	50 mg
FLD70-10mg	FITC-lysine-dextran 70	70	10 mg
FLD70-50mg	FITC-lysine-dextran 70	70	50 mg
FLD500-10mg	FITC-lysine-dextran 500	500	10 mg
FLD500-50mg	FITC-lysine-dextran 500	500	50 mg

參考文獻(xiàn)

1. (a) Henley JR, Krueger EW, Oswald BJ, McNiven MA, J Cell Biol (1998) 141:85-99;
2. (b) Fritzsch B, Christensen MA, Nichols DH; J Neurobiol. 1993 Nov; 24(11):1481-99;
3. (c) Fritzsch B., J Neurosci Methods (1993) 50:95-103.
4. Schmued, L., Kyriakidis, K., Heimer, L., Brain Res., 526, (1990) 127-134

返回FITC標(biāo)記多糖

西寶生物專業(yè)提供TdB葡聚糖及其衍生物、熒光標(biāo)記多糖等產(chǎn)品，歡迎來電400-021-8158垂詢！