環氧活化偶聯介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-15 14:55:00【大中小】

Epoxy活化偶聯介質可用于各種含有氨基、巰基或羥基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯，應用十分廣泛。西寶生物Epoxy-activated QZT 6FF活化偶聯介質以自制的瓊脂糖凝膠為基質，采用環氧活化的方法活化瓊脂糖上的羥基，活化后即可直接用于各種配基的偶聯。西寶生物Epoxy-activated QZT 6FF活化偶聯介質具有使用方便、偶聯條件溫和、偶聯效率高和應用范圍廣（偶聯氨基、巰基和羥基）的優點。

一、產品特性

環氧活化偶聯介質的理化性質和產品特性如表1所示。

表1 環氧活化偶聯介質的理化性質和產品特性

參數	指標
基質*	6%交聯瓊脂糖凝膠
活化基團	環氧基
形狀	球形
介質平均粒徑	90 μm (45-165)
活化基團密度	20-40 μmol/ml wet gel
偶聯條件	pH 9-13，溫度20-40℃，時間5-24 h，可以在水相或者有機相中偶聯
最高流速（25℃）	600 cm/h
推薦流速	<150 cm/h
最高耐壓	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20℃（異丙醇）

*：除6FF基質外，也可以提供4B、4FF和6B基質的環氧活化介質。

二、應用范圍

西寶生物Epoxy活化偶聯介質廣泛用于各種含有氨基、巰基或羥基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯。

三、操作步驟

具體的操作步驟如下（以10 mL活化膠偶聯BSA為例）：

清洗：用10-20倍膠體積的去離子水沖洗（大于5次）保存于異丙醇的環氧活化膠，除去異丙醇，抽干，將10 mL（約7.5 g）加入到30 ml的反應器（磨口三角瓶）中，備用。
偶聯：稱取100 mg BSA，溶解于15 mL 0.1 M碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液（pH 10.5），加入到抽干的活化膠中，在搖床上振蕩，37℃偶聯12-24 h；反應完畢后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干，收集料液用于未偶聯 BSA的分析和偶聯配基密度的計算，偶聯配基的微球水洗后抽干。其他配基的偶聯方法與BSA類似，但反應條件（pH、溫度、時間、配基加入量）需要根據配基的特性和應用的需求進行適當調整。若配基含有游離巰基，可選用0.1 M硼砂-硼酸緩沖液，pH 8.6，通過巰基進行偶聯。（偶聯注意事項：偶聯氨基可選用pH 9-13的緩沖液，偶聯巰基可選用pH 8.6的緩沖液；避免使用可以和環氧基反應的含氨基的緩沖液，可選用磷酸鹽、碳酸鹽、硼酸鹽和氫氧化鈉溶液；pH越高、溫度越高，偶聯速度越高；時間越長，偶聯反應越徹底，但偶聯條件的選擇還要兼顧配基的穩定性。）
封閉：將10 mL抽干的偶聯BSA的膠加入到100 mL三角瓶中，加入30 mL 1 mol/L乙醇胺，pH 10.5溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 10.5）。反應溫度恒定在37℃，攪拌速度120 rpm，反應時間4 h。反應停止后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干，用去離子水清洗。
清洗：偶聯BSA的介質依次用5倍的去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 4.0）、去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液（pH 8.0）和去離子水充分洗滌（重復交替清洗3次），抽干，去除未反應的配基。
保存：保存于4℃、20%乙醇溶液中。

四、特色服務

（1）提供介質篩選及工藝開發的咨詢。

（2）接受客戶委托開發各種分離介質和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業的售前和售后服務。

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