胃泌素17（G-17）-磁微粒化學發光法（AE/AP） /熒光免疫層析解決方案（含保護劑評估）
1.項目背景
胃泌素（Gastrin）是一種主要由胃竇和十二指腸的Ｇ細胞分泌的胃腸激素，對調節消化道功能和維持其結構完整有重要作用。人體中95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含兩種異構體G-17和G-34，其中80%~90%是由17個氨基酸殘基所組成的G-17。G-17僅由胃竇部G細胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜損傷情況的重要指標。以G-17作為核心指標的人體血清胃功能檢測，屬于一項無創、無痛且安全、經濟的人體胃病檢測方法。這種檢測項目可以有效地減少胃癌患病風險，大幅度地提高胃癌疾病的早診以及早治概率，對于各種胃病的預防和治療都具有重要的積極意義。
《中國早期胃癌篩查及內鏡診治共識意見（2014年）》：聯合檢測血清G-17、PG I、PG I/PGII比值及Hp抗體，以增加評估胃黏膜萎縮范圍及程度的準確性。
《中國慢性胃炎共識意見2017年》明確血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17的檢測有助于判斷有無胃黏膜萎縮及其程度。
《中國早期胃癌篩查指南》（2017年）：胃功能三項檢查結合內鏡精查可以提高對胃癌的診斷率。
《慢性胃炎基層診療指南（實踐版2019）》進一步明確血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17檢測有助于慢性萎縮性胃炎的診斷。PGI、PGI/PGII比值降低，血清G-17水平升高，提示胃體萎縮為主；若PGI及PGI/PGII比值正常，血清G-17水平降低，提示胃竇萎縮為主；全胃萎縮者，PG及G-17均降低。
2. 性能表現
針對胃泌素17（G-17）的檢測，西寶生物推出4種單克隆抗體和1種抗原，適合化學發光（AE/AP）和熒光層析平臺。具體性能如下
（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行抗體交叉配對驗證）。
2.1化學發光（AE）平臺：
組合1（兩試劑模式）：
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯；
線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。
濃度值在50000pmol/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
組合2（三試劑模式）：
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）標記生物素+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）；
線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。
濃度值在50000pmol/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.2化學發光（AP）平臺：
組合3（兩試劑模式）：
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。
濃度值在50000pmol/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.3熒光免疫層析平臺：
組合4：
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901C）標記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902C）劃膜；
線性范圍：0.5pmol/L-100pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。
濃度值在50000pmol/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
組合5：
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902C）標記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901C）劃膜；
線性范圍：0.5pmol/L-100pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。
濃度值在50000pmol/L以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.4 穩定性評估
2.4.1 吖啶酯標記抗體及磁珠包被抗體穩定性
采用胃泌素17（G-17） AE發光稀釋液（貨號：DCD0523A）將胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠濃縮液、胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯濃縮液稀釋成磁珠工作液及吖啶酯工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示：
a. G-17吖啶酯工作液、磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±5%以內，表明G-17吖啶酯工作液及磁珠工作液熱穩定性良好；
b. G-17吖啶酯工作液+磁珠工作液聯合37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化也在±5%以內，表明G-17試劑熱穩定性良好。
表1 G-17磁珠及吖啶酯工作液穩定性7天數據
|
序號
|
G-17抗原稀釋濃度pmol/L
|
G-17 吖啶酯工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
|
G-17 磁珠工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
|
G-17 吖啶酯工作液+磁珠工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
|
|
S0
|
0
|
4.9%
|
-5.9%
|
6.2%
|
|
S1
|
0.5
|
6.0%
|
-5.0%
|
1.8%
|
|
S2
|
1
|
0.2%
|
-0.1%
|
-5.0%
|
|
S3
|
5
|
-0.3%
|
2.5%
|
5.5%
|
|
S4
|
25
|
4.7%
|
-1.4%
|
5.6%
|
|
S5
|
100
|
5.6%
|
1.9%
|
5.6%
|
|
S6
|
500
|
4.5%
|
2.1%
|
1.6%
|
|
S7
|
1000
|
3.9%
|
0.4%
|
0.5%
|
|
平均變化
|
3.7%
|
-0.7%
|
2.7%
|
|
2.4.2 堿性磷酸酶標記抗體穩定性
A）胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示，G-17 ALP酶工作液37℃儲存熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值平均降幅超過30%以上，表明G-17 ALP酶工作液熱穩定性差。
表2 G-17 ALP酶工作液熱穩定性3天數據（不含保護劑）
|
序號
|
G-17抗原稀釋濃度pmol/L
|
G-17 ALP酶工作液37℃熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值均值差異
|
|
S0
|
0
|
-10.8%
|
|
S1
|
0.5
|
-31.1%
|
|
S2
|
1
|
-41.1%
|
|
S3
|
5
|
-38.2%
|
|
S4
|
25
|
-33.3%
|
|
S5
|
100
|
-34.7%
|
|
S6
|
500
|
-25.8%
|
|
S7
|
1000
|
-27.0%
|
|
平均變化
|
-30.3%
|
|
B）在AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續進行胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記堿性磷酸酶的37℃熱穩定性實驗。如表2所示，G-17 ALP酶工作液37℃儲存熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均降幅在±5%左右，表明G-17 ALP酶工作液熱穩定性良好。本實驗表明蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）對G-17 ALP酶工作液的穩定性有很大幫助。
表3 G-17 ALP酶工作液熱穩定性7天數據（含保護劑）
|
序號
|
G-17抗原稀釋濃度pmol/L
|
G-17 ALP酶工作液37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
|
|
S0
|
0
|
1.8%
|
|
S1
|
0.5
|
-4.3%
|
|
S2
|
1
|
-1.5%
|
|
S3
|
5
|
-3.8%
|
|
S4
|
25
|
-6.1%
|
|
S5
|
100
|
-2.3%
|
|
S6
|
500
|
-3.0%
|
|
S7
|
1000
|
-3.0%
|
|
平均變化
|
-2.8%
|
|
2.4.3 G-17抗原穩定性
采用G-17抗原稀釋液（貨號：DCD0522A）將G-17抗原（貨號：EDD0791A）稀釋成7個梯度（液體型），進行37℃熱穩定性實驗。如表4所示：
c. G-17抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲存7天與-20℃儲存7天發光值平均降幅在5%以內，表明G-17抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲存穩定性良好；
d. G-17抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與-20℃儲存7天發光值平均降幅超5%以內，表明G-17抗原稀釋梯度（液體型）熱穩定性良好。
表4 G-17抗原稀釋梯度（液體型）穩定性7天數據
|
序號
|
G-17抗原稀釋濃度pmol/L
|
G-17 抗原稀釋梯度（液體型）2-8℃熱加速7天與-20℃儲存7天發光值均值差異
|
G-17 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與-20℃儲存7天發光值均值差異
|
|
S0
|
0
|
3.3%
|
6.0%
|
|
S1
|
0.5
|
3.5%
|
-8.3%
|
|
S2
|
1
|
-3.4%
|
0.4%
|
|
S3
|
5
|
1.3%
|
-7.1%
|
|
S4
|
25
|
0.7%
|
-9.4%
|
|
S5
|
100
|
0.2%
|
-2.7%
|
|
S6
|
500
|
2.0%
|
1.4%
|
|
S7
|
1000
|
-3.1%
|
0.5%
|
|
平均變化
|
0.6%
|
-2.4%
|
|
3.臨床相關性
3.1化學發光（AE）平臺：
西寶生物發光（AE）平臺G-17抗體配對組合1（兩試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；
西寶生物發光（AE）平臺G-17抗體配對組合2（三試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好。
3.2化學發光（AP）平臺：
西寶生物發光（AP）平臺G-17抗體配對組合3（兩試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；
3.3熒光免疫層析平臺：
西寶生物熒光平臺G-17抗體配對組合4與亞輝龍G-17試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；
西寶生物熒光平臺G-17抗體配對組合5與亞輝龍G-17試劑（化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；
4. 測試方案
4.1化學發光（AE）平臺
4.1.1抗體配對組合1（兩試劑模式）：
待測抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號：EDD0791A）
樣本/校準品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。
4.1.2抗體配對組合2（三試劑模式）：
待測抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號：EDD0791A）
樣本/校準品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測試；
試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）標記-生物素稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育5min，清洗；
第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。
測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2 化學發光（AP）平臺
抗體配對組合3（兩試劑模式）：
待測抗原：胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號：EDD0791A）
樣本/校準品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進行測試。
測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。
4.3 熒光免疫層析平臺抗體配對組合4及組合5：
待測抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號：EDD0791A）
反應條件：
樣品+稀釋液混勻（本次按照1:2稀釋），上樣，反應時間（10min-15min）；
測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
5.產品信息
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產品名稱
|
貨號
|
推薦配對
|
|
AE發光稀釋液
|
DCD0523A
|
/
|
|
AP酶標記物稀釋液
|
DCD0519A
|
/
|
|
蛋白保護劑GH
|
DCL0009A
|
推薦使用濃度20%左右
|
|
胃泌素17（G-17）抗原稀釋液
|
DCD0522A
|
/
|
|
胃泌素17（G-17）抗體
|
EKY0901B
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯（配對組合1）
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）標記生物素+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號：DEG0814A）（配對組合2）
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記堿性磷酸酶（配對組合3）
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901C）標記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902C）劃膜（配對組合4）
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902C）標記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901C）劃膜（配對組合5）
|
|
胃泌素17（G-17）抗體
|
EKY0902B
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體
|
EKY0901C
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體
|
EKY0902C
|
|
|
胃泌素17(G-17)重組抗原
|
EDD0791A
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體
（貨號：EKY0901B）包被羧基磁珠濃縮液
|
DKY1336A
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901B）標記生物素濃縮液
|
DKY1336B
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記吖啶酯濃縮液
|
DKY1336C
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902B）標記堿性磷酸酶濃縮液
|
DKY1336D
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0901C）標記熒光微球濃縮液
|
DKY1336E
|
|
|
胃泌素17（G-17）抗體（貨號：EKY0902C）標記熒光微球濃縮液
|
DKY1336F
|
|
|
AMPPD 發光底物液（即用型）
|
DCD0517A
|
|
|
AMPPD 發光底物液（即用型）
|
DCD0517B
|
|
|
羧基磁性微球，1.5um
|
DEG0800C
|
|
|
鏈霉親和素磁性微球，1.5um
|
DEG0814A-10ml
|
|
|
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）
|
AEG0786B
|
 |
 |
 |
| 官網：m.baichuan365.com | 微信服務號：iseebio | 微博：seebiobiotech |
 |
 |
 |
| 商城：mall.seebio.cn | 微信訂閱號：seebiotech | 泉養堂：www.canmedo.com |
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