肝素親和介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-16 09:24:00【大中小】

肝素（Heparin）是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大腸桿菌表達的人白介素、人前列腺生長因子、重組人血管內皮生長因子、軟骨生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、重組人酸性成纖維細胞生長因子、重組肝細胞生長因子、重組鼠肝素輔因子II、重組人血小板第四因子、重組人內皮抑素、重組人角質細胞生長因子等生物大分子結合，所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質的純化。

西寶生物肝素親和層析介質（Heparin QZT 6FF）以高交聯瓊脂糖為基質，采用環氧活化工藝，將肝素偶聯到瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學穩定性，配基不易脫落，使用壽命長，使用方便，應用廣泛。

一、產品特性

Heparin QZT 6FF親和介質的理化性質和產品特性如表1所示。

表1 Heparin QZT 6FF親和介質的理化性質和產品特性

參數	指標
基質	6%交聯瓊脂糖凝膠
配基	Heparin
形狀	球形
介質平均粒徑	90 μm (45-165)
配基密度	3.5 mg heparin/mL wet gel
動態載量	2 mg AT III/mL wet gel
流速高達（25℃）	600 cm/h
推薦流速	<150 cm/h
耐壓高達	0.3 MPa (3 bar)
pH穩定性	4-12（長時間）；4-13（短時間）
保存	4-8 ℃（0.05 M乙酸鈉+20%乙醇）

二、應用范圍

西寶生物肝素親和層析介質廣泛用于抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分離純化。

三、操作步驟

層析操作通常包括裝柱、平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

平衡：用5-10CV的平衡緩沖液（20-50 mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15 M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。
進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或微濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。
淋洗：上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線。
洗脫：用洗脫緩沖液（20-50 mM PB或Tris/HCl+1-2 M NaCl，pH 7.4-8.0，NaCl濃度需要根據目標蛋白的結合力進行適當調整）洗脫，收集流出液。可采用線性梯度或階越式梯度洗脫。
原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當介質污染比較嚴重時（反壓增加），需要對介質進行在位清洗。

（1）對于以離子鍵結合的蛋白，可用2-3 CV以上的2 M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。

（2）對沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1 M NaOH清洗（1-2 h），并用3-10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6 M Gua-HCl或8M urea清洗（0.5-1 h）。

（3）對疏水性結合的蛋白，可用0.1-0.5%的非離子去污劑清洗（1-2 h），并用3-10 CV的純水沖洗。

其它注意事項：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

四、具體應用實例

轉基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分離純化

層析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

樣品：預處理的轉基因羊奶（0.45 µm濾膜過濾，上樣10 mL）

平衡緩沖液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脫緩沖液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min