Protein G親和介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-16 09:18:00【大中小】

Protein G能特異性地與抗體的Fc區結合，所以Protein G親和介質可用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，經過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養液等樣品中得到高純度的抗體。西寶生物Protein G親和介質以高流速的瓊脂糖凝膠為基質，以重組Protein G為配基，具有很高的物理化學穩定性，配基不易脫落，壽命長，使用方便，應用廣泛。

一、產品特性

Protein G QZT 4FF親和介質的理化性質和產品特性如表1所示。

表1 Protein G QZT 4FF親和介質的理化性質和產品特性

參數	指標
基質	4%交聯瓊脂糖凝膠
配基	r-Protein G
形狀	球形
介質平均粒徑	90 μm (45-165)
配基密度	~3 mg Protein G/ml wet gel
動態載量	20-25 mg h-IgG/ml wet gel
流速（25℃）	450 cm/h
推薦流速	<150 cm/h
耐壓	0.3 MPa (3 bar)
pH穩定性	3-10（長時間）；2-11（短時間）
保存	4-8 ℃（20%乙醇）

二、應用范圍

Protein G QZT 4FF廣泛用于各種抗體的分離純化。

三、操作步驟

層析操作通常包括裝柱、平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

平衡：用5-10CV的平衡緩沖液（20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，添加適當濃度的NaCl抑制非特異性吸附）平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。
進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或微濾（0.45 μm）處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。
淋洗：上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線。
洗脫：用洗脫緩沖液（20 mM檸檬酸，pH 2.5-3.5；或0.1 M甘氨酸，pH 3.0；或20 mM乙酸鈉，pH 3.0；具體洗脫條件與抗體的結合強度和穩定性密切相關，效果不好時應進行洗脫緩沖液（種類和pH或添加劑）的優化洗脫，收集流出液。洗脫后，應立刻用堿性緩沖液（如1 M Tris/HCl, pH 9.0）將收集到的抗體溶液中和到抗體穩定的pH，避免抗體失活，維持抗體的生物活性。
再生、原位清洗：介質使用數次（5-10次，具體次數與原料的種類和來源及實驗要求有關）后，需要對介質進行再生、在位清洗。

（1）用0.1 M的乙酸或0.1 M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5 CV，然后用緩沖液洗到中性即可重復使用；

（2）也可用70%乙醇或6 M鹽酸胍淋洗柱子3-5 CV，并用3-10 CV的純水沖洗，然后用緩沖液洗到中性即可重復使用。

其它注意事項：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

四、具體應用

載量分析：利用人免疫球蛋白（血漿來源，純度95%，3 mg/mL）進行載量分析（柱體積2 ml；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1 M甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上樣量：25 mL），層析譜圖如圖1（A：西寶介質；B：進口介質）所示，結果表明兩種介質的層析譜圖（穿透行為、洗脫峰）基本一致，無明顯差異。洗脫峰的蛋白濃度分析結果表明，二者的載量相當，均在20-25 mg h-IgG/mL介質之間。
純化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A稀釋4倍）上樣進行親和層析，考察介質的分離純化效果（柱體積2 mL；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：20 mM檸檬酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上樣量：4 mL），層析譜圖如圖2所示，純度分析結果表明，經過一步親和層析，即可得到純度95%以上的IgG（圖3）。

五、特色服務

（1）提供介質篩選及工藝開發的咨詢。

（2）接受客戶委托開發各種分離介質和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業的售前和售后服務。

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