Protein A能特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，因此Protein A親和介質(zhì)可用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，經(jīng)過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。西寶生物Protein A 親和介質(zhì)以高流速瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，以重組Protein A為配基，具有優(yōu)異的物理化學穩(wěn)定性，配基不易脫落，壽命長，使用方便，應用廣泛。

表1 Protein A QZT 4FF親和介質(zhì)的理化性質(zhì)和產(chǎn)品特性

1. 平衡：用5-10CV的平衡緩沖液（20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，添加適當濃度的NaCl抑制非特異性吸附）平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。
2. 進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經(jīng)離心或微濾（0.45 μm）處理。進料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標蛋白的含量計算。
3. 淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線。
4. 洗脫：用洗脫緩沖液（20 mM檸檬酸，pH 3.0；或0.1 M甘氨酸，pH 3.0；或20 mM乙酸鈉，pH 3.0；具體洗脫條件與抗體的結(jié)合強度和穩(wěn)定性密切相關(guān)，效果不好時應進行洗脫緩沖液（種類和pH或添加劑）的優(yōu)化）洗脫，收集流出液。洗脫后，應立刻用堿性緩沖液（如1 M Tris/HCl, pH 9.0）將收集到的抗體溶液中和到抗體穩(wěn)定的pH，避免抗體失活，維持抗體的生物活性。
5. 再生、原位清洗：介質(zhì)使用數(shù)次（5-10次，具體次數(shù)與原料的種類和來源及實驗要求有關(guān)）后，需要對介質(zhì)進行再生、在位清洗。

（2）也可用0.05 M NaOH+1 M NaCl或6 M鹽酸胍淋洗柱子3-5 CV，并用3-10 CV的純水沖洗，然后用緩沖液洗到中性即可重復使用。

其它注意事項：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

1. 載量分析：利用人免疫球蛋白（血漿來源，純度95%，3 mg/mL）進行載量分析（柱體積2 ml；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1 M甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上樣量：40 mL），層析譜圖如圖1（A：進口介質(zhì)；B：西寶介質(zhì)）所示，結(jié)果表明兩種介質(zhì)的層析譜圖（穿透行為、洗脫峰）基本一致，無明顯差異。洗脫峰的蛋白濃度分析結(jié)果表明，二者的載量相當，均在40-45 mg h-IgG/mL介質(zhì)之間。
2. 純化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A稀釋4倍）上樣進行親和層析，考察介質(zhì)的分離純化效果（柱體積2 mL；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：20 mM檸檬酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上樣量：4 mL），層析譜圖如圖2所示，純度分析結(jié)果表明，經(jīng)過一步親和層析，即可得到純度95%以上的IgG。

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