疏水層析介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-16 09:03:00【大中小】

疏水層析是利用蛋白質在高鹽濃度下吸附在疏水介質的疏水基團上，降低鹽濃度時，不同蛋白按疏水性從弱到強依次被洗脫，從而達到分離純化的目的。疏水層析操作條件溫和、分辨率高，是生物大分子分離純化常用的方法之一。

西寶生物以瓊脂糖凝膠為基質的疏水層析介質保留了天然多糖化合物極好的親水性及孔結構，對生物活性大分子具有很好的相容性，特別適用于蛋白質、酶、多糖、核酸、質粒等的分離純化。疏水層析介質以自制的瓊脂糖凝膠為基質，以Butyl-S、Butyl、Phenyl為配基（疏水性依次增加），具有很好的化學和物理穩定性。

一、產品特性

疏水層析介質的理化性質和產品特性如表1所示。

表1疏水層析介質的理化性質和產品特性

參數		指標
基質		6%交聯瓊脂糖凝膠
功能基及配基密度	Butyl-S	10 μmol/mL wet gel
	Butyl	40 μmol/mL wet gel
	Phenyl (high)	40 μmol/mL wet gel
	Phenyl (low)	25 μmol/mL wet gel
形狀		球形
介質平均粒徑		90 μm (45-165)
最高流速（25℃）		600 cm/h
推薦流速		<150 cm/h
最高耐壓		0.3 MPa (3 bar)
pH穩定性		3-13（長時間）；2-14（短時間）
化學穩定性		室溫下1M NaOH、0.01M HCl、6M鹽酸胍、8M脲浸泡7天，性能無明顯變化
物理穩定性		溶液的pH或離子強度影響介質的體積變化率<2%
保存		4-30 ℃（20%乙醇）

二、應用范圍

西寶生物疏水層析介質廣泛用于蛋白質、酶、多糖、核酸、質粒等的分離純化。

三、操作步驟

層析操作通常包括裝柱、平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。具體的操作方法如下（以20 cm×1.6 cm I.D., H=7.5 cm, CV=15 mL為例）：

平衡：用5~10CV的平衡緩沖液（Buffer A，如50 mM PB+1.0-2.0 M (NH₄)₂SO₄, pH 7.0，具體的緩沖體系、鹽的種類及濃度應根據目標蛋白的穩定性及疏水性、層析介質的疏水性進行篩選和優化）以2-5 ml/min的流速平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。
進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析或添加相應量的鹽；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或微濾（0.45 μm）處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。
淋洗：以2-5 mL/min的流速上樣，并繼續用平衡緩沖液淋洗至基線。
洗脫：用洗脫緩沖液（Buffer B，如50 mM PB，pH7.0）洗脫（可采用線性梯度洗脫或階越梯度洗脫），收集流出液。
再生：每次層析之后可用3 CV低離子強度的緩沖液以2-5 mL/min的流速再生層析柱，除去疏水結合較強（可逆結合）的蛋白，然后依次用3 CV 的水沖洗，5 CV的平衡緩沖液平衡。
原位清洗：介質使用數次（具體次數與原料的種類和來源及實驗要求有關）后，需要對介質進行在位清洗，除去不可逆結合的蛋白和其他物質：
（1）對于通過離子鍵強結合的蛋白，可用2 M NaCl以1-2 mL/min的流速反向清洗10-15 min；

（2）對沉淀蛋白、疏水性結合的蛋白、脂蛋白，可用1 M NaOH以1-2 mL/min的流速反向沖洗3-4 CV；

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質，可用70%乙醇或30%異丙醇以1-2 mL/min的流速反向沖洗3-4 CV（使用高濃度的有機溶劑時，為了避免產生氣泡，應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法）。
保存：4-30℃下20%乙醇中保存（4℃下有利于長期保存）；層析柱中的介質可用20%的乙醇沖洗后保存于4-30℃。
其它注意事項：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干或密封不嚴，防止氣泡進入。

四、特色服務

（1）提供介質篩選及工藝開發的咨詢。

（2）接受客戶委托開發各種分離介質和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業的售前和售后服務。

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