凝膠過濾介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-16 10:29:00【大中小】

凝膠過濾技術在酶、蛋白質、多肽、核酸等生物大分子的分離純化中起重要的作用，在各種柱層析的分離中是較溫和的處理方法。凝膠過濾分離的原理不是通過分離介質與目的物分子間功能基的相互作用，而是根據被分離物的分子大小進行分離，因此又稱為體積排阻色譜或分子篩層析等。生物分子比鹽的分子量大很多，使用凝膠過濾介質進行脫鹽操作，十分方便、可靠。

西寶生物凝膠過濾介質（GM1250、GM1225）是以魔芋葡甘聚糖為基質的新型凝膠過濾層析介質，為經過交聯的珠狀凝膠。這是一類無功能基團的惰性物質，不與溶質分子發生作用，分離條件溫和，并可在相當廣的溫度范圍內進行操作，因此不穩定的分子尤其是那些對pH值、金屬離子濃度敏感的、對環境要求苛刻的生物分子均適用此介質。為滿足蛋白質的特殊要求，可以在多種條件下，如高離子強度、低離子強度、以及脲、鹽酸胍存在的環境下進行分離純化。

該類凝膠不但可用于生物制品的脫鹽和分離純化，也適用于大規模生物制品的分離過程。GM凝膠過濾層析介質由于交聯程度不同，具有不同的分離范圍，可以根據實際需要選擇。魔芋葡甘聚糖微球具有優良的生物相容性，同時具有蛋白回收率及分辨率高等優點。

一、技術指標

技術參數	GM1250	GM1225
骨架結構	交聯魔芋葡甘聚糖
外觀	透明珠狀體
粒徑（μm）	100～160 (濕態) d₅₀
蛋白分離范圍（Da）	10³～10⁴	4×10³～3×10⁴
pH 穩定范圍	2～13
原位清洗pH	2～13

二、產品特性

1. 優良的物理化學穩定性，較長的使用壽命

具有優良的物理化學穩定性。介質在常規溶液包括水、鹽溶液、有機溶劑、堿及弱酸溶劑中均較穩定，可在6 M鹽酸胍、8 M尿素、1 M NaOH溶液及0.1 M的鹽酸中經一周浸泡性能無明顯變化。不適宜在強酸條件下工作，通常只能接觸強酸的稀溶液。在較稀溶液中可以長期接觸，如在0.02 mol/L鹽酸中經6個月后，仍無明顯變化。

pH中性的濕態珠體可經受120℃、30分鐘高壓滅菌，不會影響層析性能。GM凝膠過濾介質可承受一定的壓力。

2. 較高的選擇性和分辨率

介質在高流速下仍保持高分辨率及選擇性。

3. 較低的反壓

介質顆粒大小分布均勻，在高流速下能保持低反壓，發揮高動力載量和高分辨率的特點。

4. 高重復性易于放大

先進的制備技術及嚴密的質量保障體系，使凝膠性能具有高重現性，加之該凝膠易于裝柱，更利于實驗室及生產規模的工藝放大。

5. 蛋白質的高回收率

介質非特殊吸附性極低，可確保生物制品的高回收率。

6. 使用方便

介質提供溶脹濕態產品，使用前不需進行溶脹，可即買即裝柱，便于使用。

三、使用注意事項

裝柱：凝膠過濾層析具有設備簡單，易于操作等優點，但裝柱是影響分離效果的重要步驟，必須有分布均勻的柱體結構，不能產生分層現象，不能存在“紋路”或氣泡。只有良好的裝柱才能保證層析正常工作。
柱的重復使用及保存：西寶生物凝膠過濾介質不會與被分離物質發生作用，因而在層析分離后，只要稍加平衡就能進行下一周期的工作，不必經過特殊處理，即可反復使用，連續使用不影響分離效果。
在凝膠使用多次后，會有一些雜質污染凝膠或層析床的表面，此時要做適當的處理，去除這些“污染物”。當層析介質顏色發生明顯變化，甚至層析柱表面出現沉淀物，使表面有明顯的板結時，要對層析柱進行凈化處理，可使用溫水或緩沖液進行洗滌，也可使用0.2 mol/L的NaOH和 0.5 mol/L NaCl的混合溶液進行原位清洗，通常可以洗掉一些污染物。以恢復層析柱的功能。經常使用的層析柱以濕態保存為好。
上樣：凝膠介質在進行脫鹽及蛋白分離過程，要選取適當的上樣量可得到優良的分離純化效果，上樣量為柱體積的5～10%，脫鹽操作上樣量可高達柱床體積的30%左右。
操作流速：凝膠介質可承受一定壓力，可在常壓及0.1MPa條件下工作，（以1500px*2.6 cm I.D.，CV=300 mL的脫鹽柱為例）推薦較佳流速為3-5mL/min（脫鹽操作）或1-2 mL/min（凝膠過濾操作）。

四、預裝柱使用方法及注意事項

對于尺寸為1500px*2.6 cm I.D.，CV=300 mL的脫鹽預裝柱（GM1250），建議采用如下的操作步驟進行操作。

（1）平衡：采用3-5mL/min（脫鹽操作）或1-2 mL/min（凝膠過濾操作）的流速（后續操作也采用相同流速）平衡柱子1.5-2.0 CV。

（2）上樣：脫鹽操作可上樣30-60 mL（具體體積可根據實際脫鹽效果調整，與蛋白分子量和鹽濃度相關），凝膠過濾分離蛋白時上樣體積控制在15 mL左右。

（3）洗脫：繼續用緩沖液洗脫，收集蛋白峰。

（4）保存：用純水沖洗1 CV后，用20%乙醇沖洗1.5CV，然后將預裝柱進、出口密封好，室溫保存。

注意事項：

（1）流動方向：按照柱子的方向（適配器所在的柱子上方為流動相入口方向）操作；

（2）流速（壓力）：在推薦流速和壓力（小于0.1 MPa）下使用，防止柱床壓塌、變形影響柱效；

（3）防止流動相走干導致柱子進氣泡；

（4）保存在20%乙醇（室溫）防止介質長菌。

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