凝膠過濾介質——層析介質優選西寶生物
凝膠過濾技術在酶、蛋白質、多肽、核酸等生物大分子的分離純化中起重要的作用,在各種柱層析的分離中是較溫和的處理方法。凝膠過濾分離的原理不是通過分離介質與目的物分子間功能基的相互作用,而是根據被分離物的分子大小進行分離,因此又稱為體積排阻色譜或分子篩層析等。生物分子比鹽的分子量大很多,使用凝膠過濾介質進行脫鹽操作,十分方便、可靠。
技術參數
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GM1250
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GM1225
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骨架結構
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交聯魔芋葡甘聚糖
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外觀
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透明珠狀體
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粒徑(μm)
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100~160 (濕態)
d50
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蛋白分離范圍(Da)
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103~104
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4×103~3×104
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pH 穩定范圍
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2~13
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原位清洗pH
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2~13
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1. 優良的物理化學穩定性,較長的使用壽命
2. 較高的選擇性和分辨率
3. 較低的反壓
4. 高重復性易于放大
5. 蛋白質的高回收率
6. 使用方便
- 裝柱:凝膠過濾層析具有設備簡單,易于操作等優點,但裝柱是影響分離效果的重要步驟,必須有分布均勻的柱體結構,不能產生分層現象,不能存在“紋路”或氣泡。只有良好的裝柱才能保證層析正常工作。
- 柱的重復使用及保存:西寶生物凝膠過濾介質不會與被分離物質發生作用,因而在層析分離后,只要稍加平衡就能進行下一周期的工作,不必經過特殊處理,即可反復使用,連續使用不影響分離效果。
- 在凝膠使用多次后,會有一些雜質污染凝膠或層析床的表面,此時要做適當的處理,去除這些“污染物”。當層析介質顏色發生明顯變化,甚至層析柱表面出現沉淀物,使表面有明顯的板結時,要對層析柱進行凈化處理,可使用溫水或緩沖液進行洗滌,也可使用0.2 mol/L的NaOH和 0.5 mol/L NaCl的混合溶液進行原位清洗,通常可以洗掉一些污染物。以恢復層析柱的功能。經常使用的層析柱以濕態保存為好。
- 上樣:凝膠介質在進行脫鹽及蛋白分離過程,要選取適當的上樣量可得到優良的分離純化效果,上樣量為柱體積的5~10%,脫鹽操作上樣量可高達柱床體積的30%左右。
- 操作流速:凝膠介質可承受一定壓力,可在常壓及0.1MPa條件下工作,(以1500px*2.6 cm I.D.,CV=300 mL的脫鹽柱為例)推薦較佳流速為3-5mL/min(脫鹽操作)或1-2 mL/min(凝膠過濾操作)。
對于尺寸為1500px*2.6 cm I.D.,CV=300 mL的脫鹽預裝柱(GM1250),建議采用如下的操作步驟進行操作。
(1)平衡:采用3-5mL/min(脫鹽操作)或1-2 mL/min(凝膠過濾操作)的流速(后續操作也采用相同流速)平衡柱子1.5-2.0 CV。
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